基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-09-28; 13(18): 2183-2187
Published online 2005-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i18.2183
细甘草甜素下调基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因的表达
王巧侠, 成军, 郭江, 李文凡, 魏红山
王巧侠, 兰州大学临床医学院 甘肃省兰州市 730000
成军, 郭江, 魏红山, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
李文凡, 甘肃省人民医院消化科 甘肃省兰州市 730000
王巧侠, 女, 1975-03-29生, 陕西省西安市人, 汉族, 住院医师, 兰州大学2003级传染病学硕士研究生, 主要从事慢性肝脏疾病发病机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队九五科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队十五科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队十五科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100011, 北京市东城区安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真: 010-64281540
收稿日期: 2005-07-05
修回日期: 2005-07-07
接受日期: 2005-07-08
在线出版日期: 2005-09-28
Abstract

目的: 了解甘草甜素对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子活性的调节作用, 探讨甘草甜素的抗纤维化机制.

方法: 应用聚合酶链反应(PCR)扩增基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子, 命名为TIMP-1P, 以T-A克隆法, 将TIMP-1P基因片段连入载体pGEM-Teasy. 将获得的质粒pGEMTeasy-TIMP-1P, 与报告质粒pCAT3-basic分别用NheI和XhoI 双酶切后构建TIMP-1启动子报告基因表达载体pCAT3-TIMP-1P, 以重组表达质粒pCAT3-TIMP-1P瞬时转染HepG2细胞, 4 h后以0.1 mmol甘草甜素刺激,48 h后收获细胞. 同时以转染pCAT3 -basic的HepG2细胞为阴性对照, 每组设复孔对照, 用酶联免疫吸附法(ELISA)检测标本在415 nm波长的吸光度值, 其数值反映细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达水平.

结果: 构建的报告基因表达载体pCAT3-TIMP-1P经过序列分析和酶切鉴定正确. 瞬时转染HepG2细胞后, pCAT3-basic的吸光度值为0.004±0.002, pCAT3-TIMP-1P为2.329±0.685, 经方差分析两者差异有统计学意义(F=26.075, P<0.05), pCAT3-TIMP-1在HepG2细胞中能够启动CAT的表达. 转染HepG2细胞的pCAT3-TIMP-1P经0.1 mmol甘草甜素刺激后, 其吸光度值为0.268±0.009, 同期未经甘草甜素刺激的pCAT3-TIMP-1P吸光度值为0.490±0.153, 方差分析两者差异有统计学意义(F=35.775, P<0.05).

结论: 甘草甜素可下调TIMP-1启动子的转录活性, 抑制TIMP-1的基因表达.

Keywords: 甘草甜素; 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1; 抗纤维化