基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-08-15; 13(15): 1828-1833
Published online 2005-08-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i15.1828
牛幽门螺杆菌抗体中和菌体蛋白对Hela细胞的生长抑制作用
张世联, 刘冉, 王薇
张世联, 刘冉, 王薇, 河北省疾病预防控制中心医学研究部 河北省石家庄市 050021
张世联, 男, 1956-10-01生, 河北省沧州市人, 1998年河北医科大学分子生物学专业硕士, 研究员, 主要从事慢性疾病方面的应用基础研究.
基金项目: 河北省医学科研基金项目, No. 01118.
通讯作者: 张世联, 050021, 河北省石家庄市青园街241号, 河北省疾病预防控制中心医学研究部. zhangshl75@126.com
电话: 0311-86573208
收稿日期: 2005-06-06
修回日期: 2005-06-10
接受日期: 2005-06-13
在线出版日期: 2005-08-15
Abstract

目的: 研究H. pylori菌体蛋白对Hela细胞增殖的影响及牛抗H. pylori抗体对H. pylori菌体蛋白的中和作用.

方法: H. pylori超声全菌抗原接种奶牛, 按多克隆抗体制备常规, 腋下皮下接种, 全程免疫后每1-2 mo加强1次, 琼脂双向扩散至1:32时可采集牛血制备抗血清, 同期收集牛常乳. 抗血清及牛乳低温保存备用. 经500、330、330 g/L饱和硫酸铵粗提后, 沉淀用生理盐水溶解, 对生理盐水透析24 h, 上DEAE-32柱, 收集高峰蛋白, 经SDS-PAGE鉴定后分装, -20 ℃保存. 通过Hela生长曲线确定Hela细胞的接种密度. 建立SS1及NCTC11637对Hela 细胞生长增殖功能的抑制作用的MTT分析方法, 以牛抗H. pylori IgG分别与SS1及NCTC11637共育2 h后各自对Hela增殖功能的抑制率变化来评价牛抗H. pylori IgG对SS1及NCTC11637菌体蛋白的中和作用.

结果: 细胞毒模型发现SS1与NCTC11637均能浓度依赖性地抑制Hela细胞增殖(SS1: r = 0.9 594; NCTC11637: r = 0.9 371), Hela细胞圆缩、边界突显, 胞质内可见较多颗粒, 折光性差, 至高浓度抗原孔, Hela多见碎片, 或明显皱缩. 但对于相同的细胞毒效应SS1所需浓度高于NCTC11637; 中和模型发现牛特异性IgG可分别中和SS1及NCTC11637的细胞毒作用, 且具有剂量-反应关系(SS1: r = -0.9 936; NCTC11637: r = -0.9 627).

结论: 牛抗H. pylori抗体能够剂量依赖地中和H. pylori对Hela细胞生长增殖的抑制作用.

Keywords: 牛抗H. pylori IgG; 幽门螺杆菌; Hela 细胞; SS1; NCTC11637