病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2005-07-28; 13(14): 1688-1691
Published online 2005-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i14.1688
酵母双杂交技术筛选白细胞cDNA文库中新基因NS2TP蛋白结合蛋白基因
张黎颖, 成军, 邓红, 郭江, 郭风劲, 王巧侠
张黎颖, 成军, 郭江, 郭风劲, 王巧侠, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
邓红, 西安交通大学第二医院感染科 陕西省西安市 710004
张黎颖, 女, 1978-10-26生, 陕西省西安市人, 汉族, 2002年毕业于西安交通大学临床医学系, 获医学学士学位, 2005年毕业于西安交通大学医学系, 获医学硕士学位, 主要研究方向是肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学机制.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100011, 北京安东城区安外大街地坛公园13号, 北京市地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真: 010-64281540
收稿日期: 2005-01-10
修回日期: 2005-03-22
接受日期: 2005-05-25
在线出版日期: 2005-07-28
Abstract

目的: 筛选HCV非结构蛋白2(NS2)反式调节蛋白(NS2TP)的结合蛋白, 探讨HCV的致病机制及新蛋白NS2TP的生物学功能.

方法: 应用酵母双杂交系统3, 将PCR法扩增的NS2TP基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒, 转化单倍体酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人白细胞文库质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合, 在营养缺陷型培养基和X-a-半乳糖(X-a-gal)上进行双重筛选, 提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌氨苄青霉素-LB平板上选择并测序, 结果在GenBank中进行生物信息学分析.

结果: 筛选出与NS2TP结合的蛋白基因25个, 其中包括细胞色素p450 2E1、核心蛋白聚糖、p68、b2微球蛋白、羧肽酶N2等已知功能基因及3个未知功能序列.

结论: 为阐明新蛋白NS2TP的分子生物学功能及HCV的致病机制提供了新的思路.

Keywords: 病型肝炎病毒; 酵母双杂交; NS2TP蛋白