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世界华人消化杂志. 2005-07-28; 13(14): 1679-1683
Published online 2005-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i14.1679
Published online 2005-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i14.1679
重组人内皮抑素真核表达载体pCD-sEndo的构建和表达
邵俊伟, 卢绮萍, 广州军区武汉总医院普通外科 湖北省武汉市 430070
刘然义, 黄文林, 中山大学肿瘤研究所 广东省广州市 510060
易继林, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科 湖北省武汉市 430030
邵俊伟, 男, 1970-01-15生, 湖北省孝感市人, 汉族, 2004年华中科技大学同济医学院医学博士毕业, 主治医师, 主要从事肝胆外科治疗和基础研究.
通讯作者: 邵俊伟, 430070, 湖北省武汉市武昌珞狮路76号书香门第801, 广州军区武汉总医院普通外科. sjwsjw555555@yahoo.com
电话: 027-87164789
收稿日期: 2005-05-19
修回日期: 2005-05-22
接受日期: 2005-06-08
在线出版日期: 2005-07-28
修回日期: 2005-05-22
接受日期: 2005-06-08
在线出版日期: 2005-07-28
Abstract
目的: 构建表达人内皮抑素的重组真核表达载体, 并将其转染人肝癌SMMC-7721细胞, 观察其体外抑制血管生成的活性.
方法: 将含有IL-2分泌肽的人endostatin全长cDNA插入真核表达载体pcDNA3.0产生重组质粒pCD-sEndo, 利用阳离子脂质体介导将其体外转染人肝癌细胞SMMC-7721细胞, G418筛选后得到阳性克隆, 并被命名为SMMC/sEndo, 采用Western-blot检测转染细胞上清中endostatin蛋白的表达, 鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验检测转染细胞上清中内皮抑素蛋白的生物活性.
结果: 成功构建endostatin基因的真核表达质粒pCD-sEndo并经酶切和序列测定证实, 通过阳离子脂质体转染SMMC-7721细胞, Western-blot显示转染细胞上清有人endostatin蛋白的表达, Mr 20 000, 而转然空质粒对照组未检测到目的蛋白. CAM实验显示在给予内皮抑素蛋白的鸡胚绒毛膜血管稀疏, 血管密度明显减少, 并且随着蛋白量的增加, 血管减少程度加强.
结论: 重组endostatin真核表达质粒构建正确, 转染SMMC-7721细胞后可有效表达具有生物学活性的人endostatin蛋白并能分泌到细胞外.
Keywords: 内皮抑素; 重组真核表达载体; 肝癌