Published online 2005-06-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i11.1291
修回日期: 2005-03-27
接受日期: 2005-04-01
在线出版日期: 2005-06-15
目的: 对国产荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测乙型肝炎病毒聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸基序(HBV YMDD)变异的试剂进行临床应用评价.
方法: 慢性乙型肝炎患者外周血浆标本217份, 分别采用荧光标记Taqman探针定量PCR法(FT-PCR)和荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测HBV DNA含量和YMDD及其变异; 其中78份HBV DNA阳性标本采用基因型特异性多引物对巢式PCR法进行基因分型(A-F), 30份标本用PCR产物克隆测序法检测HBV YMDD及其变异.
结果: 血浆标本HBV DNA阳性率(≥1.0×106 copies/L)为75.6%(164/217).YMDD及其变异检出率为67.7%(147/217), 其中YMDD 44.9%(66/147), YIDD 22.5%(33/147), YVDD 17.7%(26/147), YIDD/YVDD混合株10.9%(16/147), 其他混合株4.0%(6/147); 结合HBV DNA含量, HBV YMDD及其变异的检出下限为HBV DNA = 5.0×106 copies/L, 但在106 copies/L时检出率较低, 仅为36.4%, 随着HBV DNA含量增高, 检出率显著增高(>80%), 且在107 copies/L时即有显著增高(χ2 = 7.177, P <0.01).在基因分型的78份标本中, C基因型占89.8%, B和D基因型分别占8.9%和1.3%, YMDD及其变异总检出率为100%,变异总检出率为59.0%; 1份D基因型YMDD及其变异检测为YIDD/YVDD混合变异; B, C两种基因型变异检出率分别为71.4%和55.7%, 但二者无统计学差异.以测序法的检测结果为相对标准,则FH-PCR-MC法检测HBV YMDD及其变异的相对敏感性、特异性和符合率分别为96.3%(26/27), 100%(3/3)和96.7%(29/30); 对于HBV YMDD及其变异的类型, 两种方法检测结果一致.
结论: FH-PCR-MC法是一种快速、特异的HBV YMDD及其变异检测方法, 具有较高的检出率, 且能区分YMDD及其变异的类型.