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两种启动子调控下PNP基因载体的构建和差异性表达
蔡晓坤, 林菊生, 刘址忠, 周鹤俊, 梁扩寰, 华中科技大学附属同济医院消化内科肝病所 湖北省武汉市 430030
蔡晓坤, 男, 1973-11-09生, 福建省惠安县人, 2002年华中科技大学同济医学院博士生, 主要从事消化系统疾病的基因治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金重点项目 , No. 30330680 .
通讯作者: 林菊生, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病所. linjusheng2001@163.net
电话: 027-83662578 传真: 027-83662578
收稿日期: 2004-06-16
修回日期: 2004-06-29
接受日期: 2004-07-15
在线出版日期: 2004-09-15
修回日期: 2004-06-29
接受日期: 2004-07-15
在线出版日期: 2004-09-15
Abstract
目的: 分别构建巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)通用启动子和甲胎蛋白(a-fetoprotein, AFP)杂合启动子[HRE]AF调控的PNP基因表达载体并检测、分析二者的差异表达.
方法: 将[HRE]AF启动子插入载体pcDNA3.0, 构建肝癌细胞特异表达载体p[HRE]AF; 将PNP基因分别插入pcDNA3.0和p[HRE]AF, 构建两种启动子调控的PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP和p[HRE]AF/PNP; 经酶切、PCR及测序鉴定各重组体. 用脂质体介导法将两PNP基因载体转染不同细胞株, RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达, 分析二者表达的特点.
结果: 各目的片段均成功插入相应载体中, CMV启动子调控的PNP基因在各株细胞中均实现了表达, 而[HRE]AF启动子调控的PNP基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了组织特异性表达.
结论: 两PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体, p[HRE]AF/PNP还实现了在AFP阳性, 尤其是AFP阴性肝癌细胞中的靶向性表达.
Keywords: N/A