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正常人结肠上皮细胞体外培养和鉴定
张安平, 刘宝华, 张连阳, 王亚旭, 李春穴, 中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所普通外科 重庆市 400042
通讯作者: 刘宝华, 400042, 重庆市大坪长江支路10号, 中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所普通外科. lbh57268@163.com
电话: 023-68757248
收稿日期: 2004-05-12
修回日期: 2004-05-20
接受日期: 2004-06-17
在线出版日期: 2004-08-15
修回日期: 2004-05-20
接受日期: 2004-06-17
在线出版日期: 2004-08-15
Abstract
目的: 探讨正常人肠上皮细胞(intestinal epithelial cells, IEC)的分离、体外培养方法, 为研究IEC以及与IEC相关疾病建立合适的细胞模型.
方法: 正常结肠黏膜取自外科手术的大肠恶性肿瘤患者距肿瘤10 cm的结肠组织, 联合运用I型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化分离IEC, 接种于含多种促IEC生长的营养成分的DMEM培养液内, 根据IEC和成纤维细胞贴壁时间的差异并运用胶原酶来纯化IEC, 通过观察IEC生长状态、形态特征、超微结构及检测上皮细胞膜抗原对IEC进行鉴定.
结果: 联合运用I型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化1 h可分离出健全绒毛隐窝单位, 2 wk左右细胞可铺满整个玻片. 免疫细胞化学检测该细胞为阳性细胞, 纯度高.
结论: 联合运用I型胶原酶和嗜热菌蛋白酶, 可分离培养出高纯度未凋亡的ICE.
Keywords: N/A