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胚胎干细胞诱生的胰岛素分泌细胞分泌胰岛素的研究
刘星霞, 李府, 马秀峰, 时庆, 沈柏均, 山东大学齐鲁医院低温医学研究室 山东省济南市 250012
缪兵, 山东大学医学院生理学研究所 山东省济南市 250012
刘星霞, 女, 1970-01-07生, 山东省临清市人, 汉族. 1996年上海医科大学医学硕士, 2002年山东大学博士生. 主要从事干细胞诱导分化及移植治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 , No. 30271248 .
通讯作者: 沈柏均, 250012, 山东省济南市, 山东大学齐鲁医院低温医学研究室. shenbaijun@21cn.com
电话: 0531-2169215 传真: 0531-6927544
收稿日期: 2004-02-11
修回日期: 2004-02-12
接受日期: 2004-02-13
在线出版日期: 2004-08-15
修回日期: 2004-02-12
接受日期: 2004-02-13
在线出版日期: 2004-08-15
Abstract
目的: 研究小鼠胚胎干细胞ES-D3诱生的胰岛素分泌细胞(IPCs)分泌胰岛素的能力及其所分泌的胰岛素的活性.
方法: 将ES-D3细胞培养于经处理的鼠胚成纤维细胞滋养层上保持未分化状态扩增, 对数生长期时转入无血清含bFGF的DMEM液进行诱导, 隔天换液, 21 d后, 采用DTZ染色、免疫细胞化学染色和ELISA等方法检测胰岛素的生成与分泌情况; 用RT-PCR法检测PDX-1、Insulin1、Insulin2和Glut2等胰岛素分泌细胞相关基因mRNA的表达, 并通过动物实验研究生成的IPCs所分泌的胰岛素的降糖活性.
结果: 在诱导21 d, DTZ染色法观察到被DTZ染成洋红色的IPCs; 免疫细胞化学染色法显示诱导体系中有胰岛素特异性免疫反应阳性的细胞群; ELISA法测定结果表明IPCs受高糖刺激后分泌胰岛素, 动物实验证明所分泌的胰岛素具有降糖活性; RT-PCR法检测到有Insulin2 和PDX-1 mRNA的表达, Insulin1呈弱表达, Glut2不表达.
结论: 小鼠胚胎干细胞ES-D3诱生的IPCs能够合成并分泌胰岛素, 而且分泌的胰岛素具有降糖活性.
Keywords: N/A