幽门螺杆菌
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世界华人消化杂志. 2004-08-15; 12(8): 1818-1822
Published online 2004-08-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i8.1818
幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB的表达和免疫学活性
代丽萍, 段广才, 范清堂, 郗园林, 张荣光
代丽萍, 段广才, 郗园林, 张荣光, 郑州大学公共卫生学院流行病学教研室 河南省郑州市 450052
段广才, 范清堂, 河南省分子医学重点学科开放实验室 河南省郑州市 450052
代丽萍, 女, 1970-05-07生, 河南省内黄县人, 汉族, 1993年河南医科大学本科毕业, 1997年河南医科大学硕士研究生毕业, 2003年郑州大学博士研究生毕业, 副教授, 主要从事分子流行病学与基因工程疫苗方面的研究.
基金项目: 河南省创新人才工程基金资助项目, No. 2000-84; 河南省科技攻关项目, No. 0424410035.
通讯作者: 段广才, 450052, 河南省郑州市大学路40号, 郑州大学公共卫生学院流行病学教研室. gcduan@public2.zz.ha.cn
电话: 0371-6911453 传真: 0371-6969270
收稿日期: 2004-03-05
修回日期: 2004-03-12
接受日期: 2004-03-18
在线出版日期: 2004-08-15
Abstract

目的: 构建表达幽门螺杆菌(H. pylori)融合蛋白HspA-UreB的重组表达质粒, 并研究其免疫学活性.

方法: 定向克隆方法将郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA和ureB基因融合连接入原核表达载体pET30(a), 构建重组表达质粒pET-HU27. 该质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导, SDS-PAGE分析融合蛋白HspA-UreB表达情况. Ni2+柱亲和层析纯化融合蛋白, 与小鼠免疫血清进行Western blot分析, 检测融合蛋白的免疫反应性.

结果: 特异PCR法与质粒酶切鉴定证实重组表达质粒pET-HU27构建成功. SDS-PAGE分析显示在82.1 KDa处出现特异蛋白带, 占菌体总蛋白的21%, 亲和层析法获得纯度为91%的纯化融合蛋白, 经免疫小鼠制备的血清可以识别该融合蛋白.

结论: 成功构建表达H. pylori HspA-UreB融合蛋白的重组表达质粒, 表达的融合蛋白具有良好的免疫反应性.

Keywords: N/A