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应用基因表达谱芯片技术筛选NS3TP1转染细胞差异表达基因
纪冬, 成军, 刘妍, 王建军, 郭江, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-03-15
修回日期: 2004-04-01
接受日期: 2004-05-11
在线出版日期: 2004-07-15
修回日期: 2004-04-01
接受日期: 2004-05-11
在线出版日期: 2004-07-15
Abstract
目的: 应用基因芯片技术, 检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活基因1(NS3TP1)的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响, 进一步NS3TP1蛋白可能的分子生物学功能.
方法: 设计并合成NS3TP1基因序列特异性的引物, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS3TP1蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-NS3TP1. 以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.
结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定, 证实准确无误, 提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 152个基因表达谱的筛选中, 发现有26个基因表达水平显著上调, 14个基因表达水平显著下调.
结论: 应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS3TP1转染细胞后差异表达基因, 为进一步阐明NS3TP1蛋白可能的生物学功能及HCV的致病机制提供理论依据.
Keywords: N/A