病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-07-15; 12(7): 1559-1563
Published online 2004-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i7.1559
应用基因表达谱芯片技术筛选HBV前-S2蛋白反式调节基因
纪冬, 成军, 董菁, 刘妍, 王建军, 郭江
纪冬, 成军, 董菁, 刘妍, 王建军, 郭江, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
纪冬, 男, 1975-12-05生, 河北省怀来县人, 汉族, 2002年解放军军医进修学院传染病学硕士生, 医师, 从事病毒性肝炎的临床治疗及实验研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队九五科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队十五科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队十五科技攻关项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-03-15
修回日期: 2004-04-01
接受日期: 2004-05-11
在线出版日期: 2004-07-15
Abstract

目的: 乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV S基因编码的具有多种功能的蛋白质. 前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响. 为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因, 我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-preS2分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析.

方法: 以含有HBV全基因组的质粒G376-7(GenBank号: AF384371)作为模板, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增前-S2蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-preS2. 以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.

结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定, 证实准确无误, 提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 152个基因表达谱的筛选中, 发现有42个基因表达水平显著上调, 36个基因表达水平显著下调.

结论: HBV的前-S2蛋白是一种反式激活因子, 前-S2基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.

Keywords: N/A