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HBV PreS2S/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达
陈红梅, 白雪帆, 黄长形, 李光玉, 洪沙, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院感染科 陕西省西安市 710038
陈红梅, 女, 1975-06-16生, 山东省阳信县人, 汉族, 1998年滨州医学院本科毕业, 1998-2004年于第四军医大学攻读硕、博士学位.主要从事乙型病毒性肝炎防治的研究.
通讯作者: 陈红梅, 710038, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院感染科.
电话: 029-87259845
收稿日期: 2003-11-26
修回日期: 2003-12-19
接受日期: 2004-01-08
在线出版日期: 2004-05-15
修回日期: 2003-12-19
接受日期: 2004-01-08
在线出版日期: 2004-05-15
Abstract
目的: 构建含HBV PreS2S 和Fc融合基因的真核表达载体pcDNA3 S2S/Fc并在真核细胞中进行表达.
方法: 应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension, 简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/Fc, 回收后克隆到pGEM-T Easy TA克隆载体, 获得合适的酶切位点, 再采用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA3中, 得到真核重组载体pcDNA3 S2S/Fc. 然后用脂质体法转染SP2/0细胞.
结果: 对重组载体进行了限制性酶切鉴定及测序分析, 证明连接正确; 经间接免疫荧光检测证实该重组载体能在真核细胞中表达插入的外源性基因编码的融合蛋白.
结论: 真核表达载体pcDNA3 S2S/Fc的成功构建及在SP2/0细胞中的有效表达, 为进一步探讨HBV感染的特异性免疫治疗提供了实验依据.
Keywords: N/A