病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-04-15; 12(4): 855-858
Published online 2004-04-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i4.855
表达谱基因芯片技术研究甘草甜素上调白介素-18基因的表达
王建军, 李宝伟, 成军, 刘妍, 徐志强, 杨倩, 纪冬, 党晓燕, 王春花
王建军, 成军, 刘妍, 徐志强, 杨倩, 纪冬, 党晓燕, 王春花, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
李宝伟, 中国人民解放军总医院麻醉科 北京市 100853
王建军, 男, 吉林省人, 汉族, 1975-06-17生, 医师, 1999年毕业于第一军医大学, 获得医学学士学位, 军医进修学院内科传染病专业2001级硕士学位研究生, 主要从事传染病临床与病毒性肝炎的发病机理研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-11-13
修回日期: 2003-12-01
接受日期: 2003-12-16
在线出版日期: 2004-04-15
Abstract

目的: 了解甘草甜素调节白介素-18(IL-18)基因启动子的活性, 为甘草甜素的作用机制提供理论依据.

方法: 应用基因表达谱芯片技术对于甘草甜素刺激HepG2细胞之后的基因表达谱进行研究. 聚合酶链反应(PCR)扩增IL-18基因启动子, 命名为IL-18P. 以T-A克隆法, 将IL-18P基因片段连入载体pGEM-T. 将获得的质粒pT-IL-18P, 与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和Bgl II 双酶切后构建IL-18启动子报告基因表达载体pCAT3-IL-18P, 以重组表达质粒pCAT3-IL-18P瞬时转染HepG2细胞, 以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照, 甘草甜素刺激后24 h后收获细胞. 用酶联免疫黏附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性.

结果: 表达谱基因芯片研究结果表明, 甘草甜素可上调IL-18基因表达水平达2.815倍. 构建的报告载体pCAT3-IL-18P经过序列分析和酶切鉴定正确. pCAT3-IL-18P和甘草甜素瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的7.7倍, pCAT3-IL-18P的1.5倍.

结论: 甘草甜素可以上调IL-18启动子的活性, 进而上调IL-18基因的表达. 为深入了解甘草甜素的免疫调节作用及其在病毒的清除过程中的作用机制提供新的理论依据.

Keywords: N/A