病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-04-15; 12(4): 805-808
Published online 2004-04-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i4.805
乙型肝炎病毒E抗原结合蛋白E-19的猴同源基因的克隆化与序列分析
吴煜, 成军, 陆荫英, 王琳, 刘妍, 张健, 李克
吴煜, 成军, 陆荫英, 王琳, 刘妍, 张健, 李克, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
吴煜, 女, 1968-11-02生, 黑龙江人, 主治医师, 军医进修学院内科传染病专业2001级硕士学位研究生, 主要从事传染病临床及病毒性肝炎的基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. C03011402, No. C30070689, No. C39970674, No. C30371288; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-11-13
修回日期: 2003-12-01
接受日期: 2003-12-16
在线出版日期: 2004-04-15
Abstract

目的: 乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)对HBV的感染和复制都不是必须的, 普遍认为他与HBV引起免疫耐受, 免疫系统功能障碍有关. 应用酵母双杂交技术我们克隆了人肝细胞cDNA文库中与HBeAg相互作用蛋白的基因E-19, 应用生物信息学技术克隆猴的E-19同源基因.

方法: 应用酵母双杂交系统3, 将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HBeAg基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合, 提取阳性菌落并测序, 确定人E-19基因序列, 利用生物信息学技术克隆猴的E-19同源基因, 并进行编码产物的序列分析.

结果: 成功克隆出人的HBeAg结合蛋白新基因E-19. 应用生物信息学技术, 确定克隆了猴E-19同源基因, 编码基因全长378 nt, 编码产物由125 aa组成.

结论: 成功克隆出人的HBeAg的肝细胞结合蛋白E-19基因, 并发现、确定了猴E-19的同源基因, 为研究E-19基因的结构与功能、表达与调控、生物学意义以及在病毒性肝炎发病机制中的作用奠定了基础.

Keywords: N/A