修回日期: 2003-07-05
接受日期: 2003-07-30
在线出版日期: 2004-03-15
目的: 了解中国人群先天性巨结肠症(HD)发病与RET基因, EDNRB基因突变的关系, 及同一患者是否两个基因同时突变的状况.
方法: 随机将HD患者分2组, 即检测RET/EDNRB组(A组)56例及EDNRB组(B组)40例, 同时设二个相同数量对照组(C组). 每人采集外周静脉血2 -3 mL经盐析法提取DNA后, 应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法, 对RET基因20个外显子中的第6, 13, 15, 17外显子(E6, 13, 15, 17)和EDNRB基因7个外显子中的第4, 5, 6外显子(E4, 5, 6)进行基因突变的检测, 将突变样品进行自动测序分析.
结果: A组中2例散发性患者的E13, E17扩增片段在SSCP分析时有泳动变位, 并经DNA自动测序仪检测为基因多态, CTG→CTT, Leu769→Leu, 散发性突变频率为4%(2/48); 2例家族性患者的E15扩增片段在SSCP分析有泳动变位, DNA测序1例为错义突变Lys889→Thr, 另1例为两个同义突变GTGAAGAGGAGCCA→GTTAAGAGGAGTCA分别在V906和S909密码子上, 家族性突变频率为25%(2/8); 1例散发性短段型患者EDNRB基因E5在SSCP分析时有泳动变位未能测序; B组中1例散发性短段性患者EDNRB基因的E4在SSCP分析有泳动变位, 经DNA测序证实在核苷酸位点831, 密码277上G→A的置换, Leu277→Leu为同义突变, 突变频率为2.7%(1/37), 家族性3例患者未检测出突变. C组未检出RET, EDNRB基因的突变. 家族性患者与散发性患者RET突变结果经统计学处理x2 = 4.95, P<0.05, OR = 8, 95%CI: 1.28-49.87.
结论: 中国人群的先天性巨结肠症发生确实与RET和EDNRB基因突变有关, 家族性HD患者RET基因突变达25%, 散发性HD患者主要以EDNRB基因突变为主, 无1例患者有RET和EDNRB两个基因同时突变. 同时显示有家族史比没有家族史发生HD的危险性大8倍, 其可信限在95%.