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人鼠嵌合Fab抗体通用表达载体的构建和抗人肝癌相关抗原HAb18G嵌合Fab抗体的表达
邢金良, 杨向民, 张思河, 姚西英, 梁瑞安, 陈志南, 中国人民解放军第四军医大学细胞工程研究中心 陕西省西安市 710032
邢金良, 男, 1972-09-22生, 黑龙江省龙江县人, 汉族, 医学博士, 讲师, 第四军医大学细胞工程研究中心.
基金项目: 国家十五"863"计划课题 , No. 2001AA215101 ; 国家自然科学基金资助课题 , No. 30200330 .
通讯作者: 陈志南, 710032, 陕西省西安市长乐西路169号,中国人民解放军第四军医大学细胞工程研究中心. chcerc2@fmmu.edu.cn
电话: 029-3374547 传真: 029-3293906
收稿日期: 2003-06-06
修回日期: 2003-08-10
接受日期: 2003-09-24
在线出版日期: 2004-02-15
修回日期: 2003-08-10
接受日期: 2003-09-24
在线出版日期: 2004-02-15
Abstract
目的: 构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体, 并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.
方法: 利用特异引物PCR扩增人IgG3的CH1和Cκ基因, 分别克隆到表达载体pComb3中, 从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C. 然后将扩增的mAb HAb18的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中, 酶切去除gIII片段后, 连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab. 转化大肠杆菌后诱导其表达, 通过ELISA检测产物的表达和定位. 最后, 利用亲合层析纯化表达产物, 进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测, 同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.
结果: 测序及酶切鉴定表明, 人IgG3的CH1和Cκ基因正确插入到pComb3中, 大小分别为324 bp和333 bp, 同时mAb HAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达. 表达产物的分子质量约为45 ku, 主要位于周质腔中. 另外, ELISA和免疫荧光检测证实, 表达产物含有人的抗体片段, 并具有与相应抗原特异结合的活性, 亲和力约为亲本抗体的10%.
结论: 成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体, 为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.
Keywords: N/A