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世界华人消化杂志. 2004-12-15; 12(12): 2911-2915
Published online 2004-12-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i12.2911
Published online 2004-12-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i12.2911
乙型肝炎病毒DNA聚合酶N末端蛋白基因芯片研究
陈国凤, 王琳, 成军, 刘妍, 张健, 邵清, 张玲霞, 李莉, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689, 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063, 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038, 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138, 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135
通讯作者: 成军, 100039, 北京市, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-05-28
修回日期: 2004-09-13
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-12-15
修回日期: 2004-09-13
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-12-15
Abstract
目的: 检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶N末端蛋白(TP)的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响, 进一步阐明TP在乙型肝炎慢性化及致肝细胞癌发生发展过程中的分子生物学机制.
方法: 根据AF384372 HBVDNA病毒株序列设计、合成HBV DNA P-TP基因序列特异性的引物, 以含有AF384372HBVDNA P全基因组cDNA的质粒G318A7作为模板, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增TP蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术将获得的HBV DNA-TP编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定, 构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-TP. 以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析.
结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定, 证实准确无误. 以单链可变区抗体的Western blot杂交技术证实构建的表达载体转染HepG2细胞之后有TP蛋白的表达, 提取高质量的mRNA并进行逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 152个基因表达谱的筛选中, 发现有111个基因表达水平显著上调, 88个基因表达水平显著下调.
结论: 应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV DNA P-TP转染细胞后差异表达基因, 为进一步阐明TP蛋白致病的分子生物学机制提供依据.
Keywords: N/A