研究快报
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世界华人消化杂志. 2004-11-15; 12(11): 2737-2739
Published online 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2737
应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白
杨艳杰, 成军, 陈东风, 王春花, 黄燕萍, 吴煜, 刘敏, 王建军, 钟彦伟, 刘妍, 张黎颖
杨艳杰, 成军, 王春花, 黄燕萍, 吴煜, 刘敏, 王建军, 钟彦伟, 刘妍, 张黎颖, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100038
陈东风, 中国人民解放军第三军医大学大坪医院消化内科 重庆市 400038
基金项目: 国家自然科学基金项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-02-14
修回日期: 2004-05-30
接受日期: 2004-06-09
在线出版日期: 2004-11-15
Abstract

目的: 通过筛选HBsAg基因启动子I(surface promoter I, SP Ⅰ)结合蛋白, 为HBV复制机制的研究探索新的途径.

方法: 应用噬菌体展示技术, 以HBsAg基因启动子I的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子, 对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程, 经噬斑的PCR扩增后, 构建克隆载体, 最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索.

结果: 噬菌体经富集后, 从随机筛选的14个克隆中得到8个阳性克隆, 成功构建了克隆载体. 序列测定后经过同源性搜索, 确定了和HBV表面抗原基因启动子I特异结合的肝细胞蛋白, 共编码7种蛋白. 其中3个克隆编码未知功能蛋白; 其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白.

结论: 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子I的结合蛋白, 分析了该蛋白的编码基因.

Keywords: N/A