病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-11-15; 12(11): 2590-2593
Published online 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2590
应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HCVp7蛋白的反式调节基因
郭江, 成军, 纪冬, 赵龙凤, 王建军, 刘妍, 黄燕萍
郭江, 成军, 纪冬, 王建军, 刘妍, 黄燕萍, 中国人民解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心 北京市 100039
赵龙凤, 山西医科大学第一附属医院感染病科 山西省太原市 030001
郭江, 男, 1976-06-13生, 山西省壶关县人, 汉族, 2002年山西医科大学传染病学硕士生, 主要从事传染病的临床工作和病毒性肝炎的实验研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No.C30070689; 军队九五科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队十五科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队十五科技攻关面上项目, No. 01MB135
通讯作者: 成军, 100039, 北京市, 中国人民解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-05-28
修回日期: 2004-09-13
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-11-15
Abstract

目的: 构建丙型肝炎病毒HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA, 克隆HCV p7蛋白反式激活相关基因.

方法: 以HCV p7表达质粒pcDNA3.1(-)-p7转染HepG2细胞, 以空载体pcDNA3.1(-)为对照; 制备转染后的细胞裂解液, 从中提取mRNA并合成cDNA, 经Rsa I酶切后将实验组cDNA分成两组, 分别与两种不同的接头衔接, 再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR, 将产物与T/A载体连接, 构建cDNA消减文库, 并转染大肠杆菌进行文库扩增, 随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析.

结果: 成功构建人HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA. 扩增后得到56个200-1 000 bp插入片段的克隆, 随机挑选其中33个插入片段测序, 并通过生物信息学分析获得其全长基因序列, 结果共获得15种编码基因, 其中1个为未知功能的新基因.

结论: 筛选到的cDNA全长序列, 包括与细胞生长调节、物质代谢、和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因.

Keywords: N/A