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世界华人消化杂志. 2004-10-15; 12(10): 2341-2344
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2341
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2341
腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠成体肝干细胞中的表达
钟晓刚, 何生, 邓靖宇, 陈波, 四川大学华西医院普外科 四川省成都市 610041
殷舞, 四川大学华西医院病理科 四川省成都市 610041
钟晓刚, 男, 1974-10-18生, 四川省自贡市人, 汉族, 2002年四川大学华西医院普外科博士生, 主要从事肝胆疾病的防治研究.
通讯作者: 何生, 610041, 四川省成都市, 四川大学华西医院普外科. zhongxiaogang@csco.org.cn
收稿日期: 2004-08-16
修回日期: 2004-08-23
接受日期: 2004-08-30
在线出版日期: 2004-10-15
修回日期: 2004-08-23
接受日期: 2004-08-30
在线出版日期: 2004-10-15
Abstract
目的: 研究腺病毒感染成体肝干细胞介导外源基因表达的可行性及建立稳定表达EGFP 的成体肝干细胞.
方法: 采用细菌同源重组法构建CMV驱动的EGFP报告基因腺病毒载体pAd-CMV-EGFP, 在293细胞中包装制备腺病毒, 并用重组腺病毒感染体外培养的成体肝干细胞WB-F344, 观察腺病毒携带的外源基因EGFP 在WB-F344细胞中的表达, 及分析病毒对肝干细胞的感染效率. 进一步单克隆培养纯化建立稳定表达EGFP 的细胞株(WB-EGFP), 并采用流式细胞技术、免疫细胞化学技术、诱导分化实验以观察其生物学特性.
结果: 成功构建腺病毒载体, 并包装制备高滴度的重组腺病毒Ad-EGFP. 重组腺病毒有效的感染WB-F344细胞, 感染率约40-70%.建立WB-EGFP细胞株, 持续传代8-9代均较稳定表达EGFP及肝干细胞表面标记, 仍保持干细胞样的增生、分化等基本生物学特性.
结论: 腺病毒可高水平的介导外源基因表达于成体肝干细胞, 是有效的基因转移系统. 稳定表达EGFP的肝干细胞株观察直观、可连续传代, 并保持干细胞的生物学特性, 可用于体内外肝细胞研究中的追踪、鉴定.
Keywords: N/A