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世界华人消化杂志. 2004-10-15; 12(10): 2329-2332
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2329
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2329
人血管能抑素canstatin基因的分子克隆
何小平, 李兆申, 屠振兴, 潘雪, 龚燕芳, 高军, 金晶, 中国人民解放军第二军医大学长海医院消化内科 上海市 200433
何小平, 女, 1973-06-26生, 江苏省灌南县人, 汉族. 主治医师, 2003年第二军医大学博士生, 研究方向为肿瘤基因治疗.
基金项目: 上海市自然科学基金资助课题 , No. 03JC14007 .
通讯作者: 李兆申, 200433, 上海市长海路174号, 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院消化内科. zsli@online.sh.cn
电话: 021-25070556 传真: 021-25074635
收稿日期: 2004-08-17
修回日期: 2004-09-09
接受日期: 2004-09-19
在线出版日期: 2004-10-15
修回日期: 2004-09-09
接受日期: 2004-09-19
在线出版日期: 2004-10-15
Abstract
目的: 克隆血管能抑素canstatin基因, 测定并分析其基因序列.
方法: 从人胎盘组织中提取总RNA, 经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出canstatin基因, 克隆进载体pUCm-T获得重组质粒pUCm-T/ canstatin, 转化E.coli DH 5a, 挑选出阳性克隆, 测定基因序列.
结果: 从人胎盘组织中提取出RNA, 10 g/L琼脂糖凝胶电泳显示3条清晰条带, 分别对应28 S, 18 S, 5 S. 分光光度计测定总RNA的A260 = 0.879, A280 = 0.410, A260:A280 = 2.095, 总RNA浓度为1.8 g/L. RT-PCR扩增产物与预期的目的基因canstatin长度一致. RT-PCR产物与载体pUCm-T连接过夜后, 转化E.coli DH 5a, 在LB平板上生长出蓝色和白色菌落. 挑选6个白色菌落做酶切鉴定, 其中一个菌落经BamH I酶切后, 只出现1条特异性条带, 位置与酶切前质粒相近, 而经Hind III酶切后, 出现2条特异性条带, 其中1条与酶切前质粒位置相近, 另1条与目的基因位置基本一致, 证实为阳性克隆. 测定该阳性克隆基因序列, 结果显示其与Genbank中公布的canstatin基因序列完全一致.
结论: 成功克隆了canstatin基因, 为进一步研究其抗肿瘤作用打下基础.
Keywords: N/A