病毒性肝炎
Copyright ©The Author(s) 2004. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2004-10-15; 12(10): 2321-2324
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2321
乙型肝炎病毒包膜大蛋白的自激活
纪冬, 成军, 陆荫英, 董菁, 郭江, 刘妍
纪冬, 成军, 陆荫英, 董菁, 郭江, 刘妍, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
纪冬, 男, 1975-12-05生, 河北省怀来县人, 汉族. 2002解放军军医进修学院传染病学硕士生, 医师. 从事病毒性肝炎的临床治疗及实验研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队九五科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队十五科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队十五科技攻关项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-05-28
修回日期: 2004-09-09
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-10-15
Abstract

目的: 构建乙型肝炎病毒包膜大蛋白的酵母表达载体, 研究其自激活作用.

方法: 用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV包膜大蛋白(LHBs), 前-S1蛋白(pre-S1), 前-S2蛋白(pre-S2)及主蛋白(SHBs)的编码基因, 并在其5'端引入EcoR I/BamH I内切酶位点, 分别连接入酵母表达载体pGBKT7中, 构建酵母表达质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后分别铺于含有X-a-半乳糖的营养缺陷型培养基SD/-Trp和SD/-Trp-His-Ade上进行自激活验证(蓝/白筛选).

结果: 成功克隆出编码各种HBV包膜蛋白的基因, 构建表达载体并在酵母细胞中表达, 转化了pGBKT7-LHBs和pGBKT7-preS1的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长, 并且可以产生a-半乳糖苷酶从而在铺有X-a-半乳糖的培养基上呈现蓝色, 而转化了pGBKT7-preS2和pGBKT7-SHBs的细胞只能在SD/-Trp的培养基上生长, 且没有变蓝.

结论: LHBs可以作为反式激活子发挥作用, 代替GAL4蛋白的激活域来激活GAL4上游激活序列(GAL UAS)和TATA盒, 从而激活了下游报告基因(ADE2, HIS3, MEL1和LacZ)的表达, 并且其自激活作用来自于前-S1结构域.

Keywords: N/A