病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-10-15; 12(10): 2316-2320
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2316
筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白4B转染细胞差异表达基因
刘妍, 王建军, 成军, 杨倩, 纪冬, 王春花, 党小艳, 徐志强
刘妍, 王建军, 成军, 杨倩, 纪冬, 王春花, 党小艳, 徐志强, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
刘妍, 女, 1973-01-15生, 辽宁省海城市人, 满族. 1995年北京医科大学毕业, 军事医学科学院免疫学专业2002级硕士学位研究生, 助理研究员. 主要从事肝炎病毒的分子生物学与病毒性肝炎发病机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-07-12
修回日期: 2004-08-09
接受日期: 2004-08-16
在线出版日期: 2004-10-15
Abstract

目的: 筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)转染细胞差异表达基因, 进一步阐明NS4B蛋白在丙型肝炎慢性化及致肝细胞癌发生发展过程中的分子生物学机制.

方法: 根据HCV-H病毒株序列设计、合成HCV NS4B基因序列特异性的引物, 以含有HCV-H全基因组cDNA的质粒pBRTM3011作为模板, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS4B蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术将获得的HCV NS4B编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定, 构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS4B. 以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析.

结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定, 证实准确无误. 以单链可变区抗体的Western blot杂交技术证实构建的表达载体转染HepG2细胞之后有NS4B蛋白的表达, 提取高质量的mRNA并逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 152个基因表达谱的筛选中, 发现有22个基因表达水平显著上调, 34个基因表达水平显著下调.

结论: 应用基因表达谱芯片成功筛选了HCV NS4B转染细胞后差异表达基因, 为进一步阐明NS4B蛋白致病的分子生物学机制提供依据.

Keywords: N/A