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世界华人消化杂志. 2004-10-15; 12(10): 2307-2311
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2307
Published online 2004-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i10.2307
前药热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的作用机制
黎成金, 王烈, 涂小煌, 宋京翔, 中国人民解放军南京军区福州总医院普外科 福建省福州市 350025
黎成金, 男, 1964-10-23生, 广西陆川人, 汉族. 2003年第四军医大学博士研究生毕业, 主治医师, 研究方向: 结肠癌的基因治疗.
通讯作者: 黎成金, 350025, 福建省福州市西二环北路156号, 中国人民解放军南京军区福州总医院普外科. licheng_jin@yahoo.com.cn
电话: 0591-2859415 传真: 0591-3796885
收稿日期: 2004-07-05
修回日期: 2004-07-09
接受日期: 2004-07-15
在线出版日期: 2004-10-15
修回日期: 2004-07-09
接受日期: 2004-07-15
在线出版日期: 2004-10-15
Abstract
目的: 探讨5-氟胞嘧啶 (5-fluorocytosine, 5-FC)热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase, CD)基因的大肠癌细胞SW480的作用及机制.
方法: 脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW480, 以G418筛选阳性克隆扩增后, 采用水浴加温法, 43 ℃作用30 min共3次, 同时给予前药5-FC进行敏感试验; RT-PCR法检测目的基因的表达, MTT法检测细胞存活率, 电镜检测细胞的形态学变化, 流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡.
结果: SW480-CEACD细胞在43 ℃作用30 min共3次条件下, CD基因能稳定表达; 热疗本身对SW480细胞有一定的杀伤作用(P <0.05), 转CD基因后, SW480细胞对5-FC的敏感性明显提高(P <0.01), 热疗与前药5-FC合用, 对SW480-CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用(P <0.01, t = 4.356, n = 9 ), 亦大于单独应用5-FC时对SW480-CEACD细胞的杀伤作用(P <0.05, t = 2.376, n = 9), 增加了SW480-CEACD细胞对5-FC的敏感性, 电镜及流式细胞术检测显示, 细胞死亡以细胞凋亡为主, 前药热化疗导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞, 凋亡细胞比例增加.
结论: 热疗与前药5-FC联合应用, 导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞, 细胞凋亡比例增加, 提高了CEA组织特异性CD/5-FC系统的靶向性杀伤作用.
Keywords: N/A