病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-01-15; 12(1): 86-88
Published online 2004-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i1.86
酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV核心蛋白结合蛋白基因
邵清, 成军, 白雪帆, 王琳, 张健, 梁耀东, 刘敏, 李强
邵清, 成军, 王琳, 张健, 梁耀东, 刘敏, 李强, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
白雪帆, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科 陕西省西安市 710039
邵清, 男, 1966-10-22出生, 汉族, 北京市人, 1991年第四军医大学本科毕业, 第四军医大学唐都医院感染科2001年级硕士研究生. 主要从事病毒性肝炎的基因治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract

目的: 用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合蛋白的基因.

方法: 用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV核心蛋白基因, 连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合, 在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落, 增菌后提取质粒, 转化入大肠杆菌, 提取质粒并测序, 进行生物信息学分析.

结果: 成功克隆出核心蛋白基因并在酵母细胞中表达, 配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共6个, 其中 2个高尔基复合体关联蛋白1, 1个Ran结合蛋白M, 1个pellino同族体2, 2个未知功能蛋白基因(KIAA1949).

结论: 成功克隆出丙型肝炎病毒核心蛋白的结合蛋白, 为进一步研究HCV的作用提供了新线索.

Keywords: N/A