病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-01-15; 12(1): 82-85
Published online 2004-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i1.82
丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP7的克隆
张健, 刘妍, 成军, 王琳, 邵清, 梁耀东, 刘敏
张健, 刘妍, 成军, 王琳, 邵清, 梁耀东, 刘敏, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
张健, 男, 1973-05-18生, 北京市人, 汉族. 1997年解放军第四军医大学本科毕业, 2001年解放军军医进修学院内科传染病学专业硕士研究生, 医师. 主要从事传染病的临床与基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract

目的: 应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活新型靶基因.

方法: 以HCV NS5A表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A转染HepG2细胞, 以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照, 提取mRNA并进行SSH分析. 对于所获基因片段序列分析表明, 其中之一为新型基因片段, 与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性, 利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对, 进行电子拼接, 根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列, 确定新型基因序列. 从HepG2细胞提取总RNA, 以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列, 并测序证实, 命名为NS5ATP7, 在GenBank中注册, 注册号为AF529368.

结果: NS5ATP5基因的编码序列全长为894个核苷酸(nt), 编码产物由297个氨基酸残基(aa)组成.

结论: HCV NS5A反式激活新型靶基因NS5ATP5的筛选与克隆, 为进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定了基础.

Keywords: N/A