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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因1的克隆
刘敏, 成军, 王琳, 邵清, 张健, 梁耀东, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
张树林, 西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061
刘敏, 女, 1969-02-19生, 陕西省西安市人, 汉族. 1993年西安医科大学本科毕业, 西安交通大学2000年内科学在读博士研究生, 主治医师. 主要从事病毒性肝炎的分子生物学发病机制研究．
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract
目的: 应用抑制性消减杂交技术(SSH)及生物信息学技术(bioinformatics)筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A反式激活新型靶基因, 进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制．
方法: 以HCV NS5A蛋白表达质粒pcDNA3．1(-)-NS5A转染HepG2细胞, 以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照, 提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析．应用分子生物学技术, 结合生物信息学技术, 分析并克隆HCV NS5A反式激活作用的新的靶基因．
结果: 对于所获基因片段序列分析表明, 其中之一为新型基因片段, 从转染pcDNA3．1(-)-NS5A的HepG2细胞提取总RNA, 以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列, 并测序证实, 命名为NS5ATP1．NS5ATP1基因的编码序列全长为1011个核苷酸(nt), 编码产物由336个氨基酸残基(aa)组成．
结论: HCV NS5ATP1是一种典型的病毒基因组编码的具有反式激活作用的蛋白, 而SSH是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术．通过这种技术, 发现了HCV NS5ATP1反式激活作用的新的靶基因, 这一发现, 为进一步研究HCV NS5ATP1蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定了基础．
Keywords: N/A