Copyright
©The Author(s) 2004. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
乙型肝炎病毒e抗原肝细胞结合蛋白新基因E-36基因表达谱芯片分析
陆荫英, 刘妍, 成军, 梁耀东, 陈天艳, 邵清, 王琳, 张玲霞, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
陆荫英, 女, 1973-08-27生, 贵州贵阳人, 汉族, 博士, 2003年军医进修学院毕业, 主治医师. 主要从事肝病的基础研究及临床工作.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, N. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract
目的: 为了研究未知功能的HBeAg结合蛋白E-36的生物学功能, 我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-E-36分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析, 筛选能被E-36反式调节的靶基因.
方法: 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增E-36蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术构建表达载体 pcDNA3.1(-)-E-36. 以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.
结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确. 提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 159个基因表达谱的筛选中, 发现有20个基因表达水平显著上调, 包括甲状旁腺激素应答的骨肉瘤B1蛋白、SLIT2、核因子B、白介素受体3、白介素6、血管紧张素I转换酶、急性髓细胞性白血病1b、caspase 2、低密度脂蛋白1、T 细胞受体重组链、肿瘤坏死因子受体、肿瘤抑制亚转化因子、细胞周期相关激酶-2、亲代谢性谷氨酸盐受体-7、唾液酸转移酶-8及5个未知蛋白; 真核细胞翻译延伸因子2基因的表达水平显著下调.
结论: E-36基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响. DNA芯片技术是分析反式激活靶基因的有效技术途径.
Keywords: N/A