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应用表达谱芯片技术对乙型肝炎病毒前-S2抗原结合蛋白S2-29反式调节基因的研究
陆荫英, 刘妍, 成军, 梁耀东, 陈天艳, 邵清, 王琳, 张玲霞, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
陆荫英, 女, 1973-08-27生, 贵州贵阳人, 汉族, 博士, 2003年军医进修学院毕业, 主治医师. 主要从事肝病的基础研究及临床工作.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract
目的: 应用基因表达谱芯片技术, 研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29过表达, 对HepG2细胞的基因表达的影响.
方法: 应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV 前-S2的肝细胞结合蛋白基因. 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增S2-29蛋白编码基因片段, 经测序鉴定后构建表达载体 pcDNA3.1(-)-S2-29, 应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-S2-29转染的人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.
结果: 筛选出肝文库中HBV 前-S2结合蛋白S2-29的编码基因, 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确. 提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1152个基因表达谱的筛选中, 发现有9个基因表达水平显著下调, 包括真核翻译延伸因子2、MAP激酶激活的死亡域、谷胱甘肽过氧化物酶、肌动蛋白、NDRG、Prosaposin、SUMO-1激活酶亚基1、胰岛素受体和1个未知功能蛋白. 1个未知蛋白编码基因的表达上调.
结论: 应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV 前-S2结合蛋白S2-29蛋白的反式调节基因, 为进一步阐明S2-29蛋白对细胞表达调控的影响提供了新的依据.
Keywords: N/A