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白细胞中与NS5ATP5蛋白结合的蛋白基因的筛选与克隆
张健, 成军, 王琳, 邵清, 陆荫英, 梁耀东, 李强, 刘敏, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
张健, 男, 1973-05-18生, 北京市人, 汉族. 1997年解放军第四军医大学本科毕业, 2001年解放军军医进修学院内科传染病学专业硕士研究生, 医师. 主要从事传染病的临床与基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract
目的: 采用酵母双杂交体系寻找与NS5ATP5相互作用的白细胞蛋白, 以探讨NS5ATP5的生物功能.
方法: 应用酵母双杂交系统3, 构建NS5ATP5诱饵质粒, 转化酵母AH109, 与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合, 于涂有x-α-gal营养缺陷型培养基上筛选生长．挑选蓝色克隆, 提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序, 然后进行生物信息学分析．
结果: 筛选出10个与NS5ATP5特异性相互作用的克隆, 其中1个为金属硫蛋白, 1个为热休克蛋白HSP60, 1个为主要组织相容性复合体II淋巴细胞抗原DQB, 5个为人类重排免疫球蛋白λ-轻链, 2个是未知功能基因．
结论: 初步克隆了NS5ATP5与白细胞结合蛋白基因, 对NS5ATP5的功能研究有一定的提示作用; 为以后研究这些能与NS5ATP5相互作用的基因在白细胞中的生理功能奠定了基础．
Keywords: N/A