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基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因
成军, 刘妍, 洪源, 王建军, 杨倩, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市 100039
成军, 男, 1963-08-17生, 山东省淄博市人, 汉族. 1986年毕业于第一军医大学军医系, 获医学学士学位, 1989年毕业于军医进修学院, 获传染病学硕士学位, 1994年毕业于北京医科大学, 获传染病学博士学位, 1994-11-17/1997-12-01在美国得克萨斯大学健康科学中心临床免疫与传染病科完成博士后研究, 教授, 主任医师. 现任中华医学会传染病与寄生虫病学分会副主任委员、中华医学会热带病与寄生虫病学分会全国常委、全军医学科学技术委员会传染病与寄生虫病学会委员. 目前从事传染病特别是病毒性肝炎的临床医疗工作和基础研究工作, 学术研究方向是肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学机制, 已出版专著5部, 发表论文及综述300篇.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No.C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-01-11
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
Abstract
目的
乙型肝炎病毒(HBV)基因组编码的HBxAg是一种很强的反式激活(transactivation)病毒蛋白, 在正常肝细胞的恶性转化(transformation)以及肝细胞癌(HCC)的形成过程中具有十分重要的作用. 为了阐明HBxAg的表达对于肝细胞基因表达谱的影响, 我们应用基因芯片技术, 对于转染和未转染的HepG2细胞进行了分析.
方法
以含有全长乙型肝炎病毒基因的pCP10质粒作为模板, 应用聚合酶链反应技术(PCR)扩增的HBxAg基因片段, 常规分子生物学技术构建HBxAg的真核表达载体pcDNA3-HBxAg, 利用脂质体转染技术转染HepG2细胞, HBxAg蛋白的表达以Western blot杂交技术证实. 从转染和非转染细胞HepG2中提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 并进行基因芯片技术分析.
结果
经过限制性内切酶分析和序列测定, 证实pcDNA3-HBxAg构建正确. HBxAg在HepG2细胞中的表达以Western blot杂交技术得到证实. 对于HBxAg重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达谱, 利用基因芯片技术进行分析. 结果表明, 16种基因的表达水平上调, 58种基因的表达水平下调. 这些基因包括细胞生长、细胞凋亡、信号转导等基因, 相信这些类型的基因在HBxAg的恶性转化中具有十分重要的作用.
结论
HBxAg是一种病毒反式激活蛋白, 对于肝细胞基因表达谱有显著影响; 基因芯片技术是分析病毒反式激活蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径.
Keywords: N/A