基础研究
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世界华人消化杂志. 2003-06-15; 11(6): 741-744
Published online 2003-06-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i6.741
内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒的包装与鉴定
李喆, 潘欣, 潘卫, 曹贵松, 闻兆章, 方国恩, 戚中田, 毕建威, 华积德
李喆, 曹贵松, 闻兆章, 方国恩, 毕建威, 华积德, 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科 上海市 200433
李喆, 男, 1974-07-29生, 天津市人, 汉族. 1998年第二军医大学军医系本科毕业, 2000年第二军医大学博士生.
潘欣, 潘卫, 戚中田, 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室 上海市 200433
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30171055.
通讯作者: 潘欣, 200433, 上海市翔殷路800号, 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室. panxinpx@yahoo.com
电话: 021-25070314 传真: 021-25070312
收稿日期: 2002-09-13
修回日期: 2002-09-20
接受日期: 2002-10-03
在线出版日期: 2003-06-15
Abstract
目的

构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒, 为下一步基因治疗打下基础.

方法

用PCR方法在hENDO基因的5'端引入IL3信号肽、3'端引入弹性蛋白连接肽序列(linker), 再与sVEGI基因连接, 插入到pCA13腺病毒载体中. 用脂质体介导包装出重组腺病毒, PCR法对重组腺病毒进行鉴定.

结果

构建完成hENDO-sVEGI融合基因重组腺病毒载体, 融合基因包括IL3信号肽、hENDO全长基因、弹性蛋白连接肽序列和sVEGI基因, 总长度约1114 bp, 经酶切鉴定、序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确. 可包装出携带融合基因的重组腺病毒, 用TCID50法测定粗制重组腺病毒滴度为2×1011 TCID50/L.

结论

成功构建了hENDO-sVEGI融合基因, 连接肽序列使两蛋白空间构象不受影响, IL3信号肽保证蛋白可被分泌至胞外. 完成携带融合基因的重组腺病毒的包装与鉴定, 为进一步开展肿瘤基因治疗研究奠定了基础.

Keywords: N/A