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表达幽门螺杆菌热休克蛋白60克隆的构建
白杨, 黄文, 林焕健, 王继德, 陈烨, 周殿元, 张亚历, 中国人民解放军第一军医大学南方医院全军消化病研究所 广东省广州市 510515
张兆山, 军事医学科学院生物工程研究所 北京市 100071
基金项目: "863"计划专题102-07-03-06、国家自然科学基金 , No. 30170890 ; 30270078 ; 军队"十五"医药卫生科研课题(OIMA-132)资助项目 .
通讯作者: 张亚历, 100071, 广东省广州市广州大道北路1838号, 中国人民解放军第一军医大学南方医院全军消化病研究所.
电话: 020-61641531
收稿日期: 2002-09-13
修回日期: 2002-09-30
接受日期: 2002-10-12
在线出版日期: 2003-05-15
修回日期: 2002-09-30
接受日期: 2002-10-12
在线出版日期: 2003-05-15
Abstract
目的
构建含Hp热休克蛋白60 (Hsp60)基因的重组载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达, 为进一步研究Hsp60的佐剂功能和免疫原性奠定基础.
方法
提取Hp染色体基因, 用PCR方法扩增Hsp60基因, 将其克隆至表达载体pET-22b(+), 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达并通过免疫印迹实验研究其免疫原性.
结果
分离得到了1.6 kb的Hsp60基因片段, 并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达, 在37 ℃诱导表达3 h后, 表达产物占细菌总蛋白的27.2%. 表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在, 其中主要是包涵体的形式, 目的蛋白占不溶性蛋白的76.6%. 经免疫印迹证实该重组蛋白可以被Hp感染患者血清所识别.
结论
成功地克隆并表达Hp Hsp60基因, 为Hp疫苗的研制打下了基础.
Keywords: N/A