基础研究
Copyright ©The Author(s) 2003. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2003-04-15; 11(4): 438-441
Published online 2003-04-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i4.438
细菌内同源重组法构建HBV S区和C区基因非复制型腺病毒载体及其体外表达
黄呈辉, 欧阳玲, 马会慧, 汤正好, 李刚, 姚集鲁
黄呈辉, 马会慧, 汤正好, 李刚, 姚集鲁, 中山大学附属第三医院传染科实验室 广东省广州市 510630
黄呈辉, 男, 1967-09-03, 江西于都人, 汉族. 1990年江西医学院本科毕业, 1997年首都医科大学硕士研究生毕业, 现在为中山大学中山医学院博士研究生, 主治医师. 主要从事病毒性肝炎研究工作.
欧阳玲, 深圳市宝安区中心血站 广东省深圳市 518101
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 30200243.
通讯作者: 黄呈辉, 510630, 广东省广州市石牌岗顶, 中山大学附属第三医院传染科实验室. chuih67@163.com
电话: 020-87596042
收稿日期: 2002-11-06
修回日期: 2002-11-15
接受日期: 2002-11-18
在线出版日期: 2003-04-15
Abstract
目的

构建表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的非复制型重组腺病毒载体, 并检测他能否在真核细胞中有效表达目的基因.

方法

扩增乙肝病毒(HBV)前S2/S基因和前C/C基因片段, 分别亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上, 与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌, 经细菌内同源重组产生分别携带HBV S 区和C区基因的重组腺病毒载体pAd-HBs和pAd-HBe, 经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-HBs和Ad-HBe; 体外转染293和Vero细胞, RT-PCR和ELISA法检测目的基因的表达.

结果

构建了表达HBsAg和HBeAg基因的重组腺病毒, 病毒滴度可达5×1012 pfu/L, 并能在真核细胞中有效表达目的基因.

结论

成功构建表达HBsAg和HBeAg的重组腺病毒载体, 为进一步开展HBV基因治疗研究提供实验基础.

Keywords: N/A