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HBeAg肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆
陆荫英, 王琳, 李克, 刘妍, 成军, 张玲霞, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
陆荫英, 女, 1973-08-27生, 贵州省贵阳市人, 汉族, 1995年贵阳医学院临床医学系毕业, 博士生, 主治医师, 主要从事肝病的基础及临床研究.
基金项目: 军队回国留学人员启动基金资助课题 , No. 98H038 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2002-10-29
修回日期: 2002-11-15
接受日期: 2002-11-28
在线出版日期: 2003-04-15
修回日期: 2002-11-15
接受日期: 2002-11-28
在线出版日期: 2003-04-15
Abstract
目的
HBeAg被认为与HBV引起免疫耐受、免疫系统功能障碍有关. 筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)相互作用蛋白的基因, 明确其具体作用机制.
方法
应用酵母双杂交系统3, 将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HBeAg基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合, 在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落, 提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌, 接种在氨苄青霉素-LB平板上选择并测序, 结果在GenBank中进行生物信息学分析.
结果
成功克隆出HBeAg基因并在酵母细胞中表达, 与肝cDNA文库配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上生长, 并变成蓝色的真阳性菌落39个, 其中有5个未知基因, 3个含金属硫蛋白2A基因的菌落, 8个补体8α基因, 1个补体因子H, 1个补体1q, 1个维甲酸受体应答元件2基因、2个细胞色素b基因、3个铁蛋白轻链, 2个NAD(P)H脱氢酶亚基, 1个3-羟基类固醇表位酶, 1个3-羟基, 3-甲基戊二酰辅酶A合成酶, 1个双-特异性酪氨酸-γ-磷酸化调节激酶1A转录子突变体, 1个Syndecans-1, 3个2胺氧化酶, 4个醛缩酶B, 1个CD81, 1个ATP合成酶6基因.
结论
成功克隆出乙型肝炎病毒e抗原的结合蛋白, 为进一步研究HBeAg在病毒装配、分泌、影响宿主免疫系统功能等方面的具体作用提供了新线索.
Keywords: N/A