大肠癌
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世界华人消化杂志. 2003-03-15; 11(3): 289-293
Published online 2003-03-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i3.289
抗人大肠癌单链抗体-胞嘧啶脱氨酶融合基因的构建及表达
方瑾, 宋今丹
方瑾, 宋今丹, 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室 辽宁省沈阳市 110001
方瑾, 女, 1961-01-02生, 天津市人, 汉族, 理学博士, 副教授. 主要从事肿瘤细胞生物学研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. 85-722-18-02.
通讯作者: 宋今丹, 110001, 辽宁省沈阳市和平区北二马路92号, 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室. jdsong@mail.cmu.edu.cn
电话: 024-23256666-5349
收稿日期: 2002-08-10
修回日期: 2002-08-21
接受日期: 2002-08-31
在线出版日期: 2003-03-15
Abstract

目的: 构建抗人大肠癌重组单链抗体ND-1scFv与酵母胞嘧啶脱氨酶CD的融合基因, 并在大肠杆菌中表达.

方法: 采用基因重组技术借助GSGGSG Linker序列将酵母胞嘧啶脱氨酶基因融合于ND-1scFv基因的3'端, 构建pET-28a(+)ND-1scFv-CD载体, 转化E. coli BL21, 经IPTG诱导, 表达二者的融合蛋白. 表达产物用Ni-NTA resin亲和层析方法纯化, 并采用ELISA检测其免疫活性, MTT法测定由ND-1scFv-CD/5FC构成的ADEPT系统对大肠癌细胞的体外杀伤作用.

结果: 序列测定表明: ND-1scFv-CD基因全长1 269 bp, 包含了732 bp的scFv基因和477 bp的CD基因. SDS-PAGE检测显示, 融合蛋白相对分子质量47 KDa, 与预测值一致. 光密度扫描结果表明, 重组蛋白占菌体蛋白总量的27%, ELISA检测证实, ND-1scFv-CD保留了与ND-1scFv相近的免疫活性. MTT实验检测结果显示, 由scFv-CD/5FC构成的ADEPT体系对大肠癌细胞具靶向杀伤作用.

结论: 成功地构建了抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv与酵母胞嘧啶脱氨酶CD的融合蛋白, 并在大肠杆菌中高效表达. 融合蛋白具有良好的免疫活性和一定的酶活性.

Keywords: N/A