病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2003-02-15; 11(2): 144-147
Published online 2003-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i2.144
复制缺陷型HCV C基因腺病毒表达载体的构建包装及鉴定
郝春秋, 冯志华, 周永兴, 聂青和, 李谨革, 贾战生, 梁雪松, 谢玉梅, 曹义战, 康文臻
郝春秋, 冯志华, 周永兴, 聂青和, 李谨革, 贾战生, 梁雪松, 谢玉梅, 曹义战, 康文臻, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心 陕西省西安市 710038
郝春秋, 男, 1965-01-14生, 河北省南宫市人, 汉族, 副主任医师, 副教授. 1987年第四军医大学空军医学系本科毕业, 2002年获博士学. 主要从事病毒性肝炎基因治疗的研究.
基金项目: 国家自然科学基金课题, No. 39800122.
通讯作者: 冯志华, 710038, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心. fengzh@fmmu.edu.cn
收稿日期: 2002-10-25
修回日期: 2002-11-01
接受日期: 2002-11-16
在线出版日期: 2003-02-15
Abstract

目的: 构建能表达HCV C基因的复制缺陷型腺病毒表达载体.

方法: 将HCV H 株C区基因定向插入到腺病毒穿梭质粒pAd. CMV-Link. 1中, 获得重组质粒pAd. HCV-C, 再与pJM17共转染293细胞, 包装腺病毒表达载体. 通过酶切、PCR及测序对穿梭质粒进行了鉴定. 对腺病毒载体进行了感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定. 利用间接免疫荧光法和Western blot检测了腺病毒载体在人肝癌细胞HepG2中的表达.

结果: 酶切、PCR及测序鉴定证实, 穿梭质粒插入片段为HCV C区基因. 包装的腺病毒载体具有良好的感染性, 可以在293细胞中形成病毒颗粒, 腺病毒载体内携带HCV C区基因, 并可以在HepG2细胞中表达HCV C抗原.

结论: 包装成功的复制缺陷型腺病毒载体可以在HepG2细胞中表达HCV C抗原, 为丙型肝炎的基因治疗及疫苗的进一步研究奠定了基础.

Keywords: N/A