肝癌
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世界华人消化杂志. 2003-11-15; 11(11): 1674-1676
Published online 2003-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i11.1674
小鼠甲胎蛋白基因的克隆真核表达载体构建及表达鉴定
田耕, 易继林
田耕, 易继林, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科 湖北省武汉市 430030
田耕, 男, 1971-03-18生, 陕西省宝鸡市人, 汉族, 博士, 主治医师.
通讯作者: 田耕, 430030, 湖北省武汉市汉口解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科. geng_tian707@hotmail.com
电话: 027-83663402
收稿日期: 2003-03-08
修回日期: 2003-03-20
接受日期: 2003-03-25
在线出版日期: 2003-11-15
Abstract
目的

克隆小鼠甲胎蛋白(AFP)基因, 构建小鼠AFP真核表达载体并进行表达鉴定.

方法

从Hepa1-6细胞中提取总RNA进行RT-PCR, 克隆出小鼠AFP基因, 亚克隆于pcDNA3.1载体, 重组阳性克隆进行酶切和测序鉴定. 重组质粒瞬时转染CHO-K1细胞, Western blot检测小鼠AFP的表达.

结果

利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中成功克隆出1.8 kb的小鼠AFP基因, 重组阳性克隆经酶切和测序鉴定证实目的基因已正确插入pcDNA3.1载体中, Western blot结果证实重组质粒pmAFP能够在CHO-K1细胞中正确表达.

结论

小鼠AFP真核表达载体构建成功, 为进一步研究其在肝癌免疫治疗中的作用奠定了基础.

Keywords: N/A