基础研究
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世界华人消化杂志. 2003-10-15; 11(10): 1520-1523
Published online 2003-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i10.1520
人工构建含丙型肝炎病毒核糖体插入位点的双顺反子表达载体
阚全程, 余祖江, 雷延昌, 杨东亮, 郝连杰
阚全程, 雷延昌, 杨东亮, 郝连杰, 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室 湖北省武汉市 430030
阚全程, 男, 1963-09-24, 河南信阳市人, 汉族, 1992年河南医科大学(现郑州大学医学院)药理学硕士, 现为华中科技大学同济医学院分子免疫学博士生.
余祖江, 郑州大学第一附属医院感染科 河南省郑州市 450052
基金项目: 国家"十五"科技攻关项目, No. 2001BA705B05; 国家重大基础研究项目, No. 973-20014CB51008.
通讯作者: 杨东亮, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室. dlyang@tjh.tjmu.edu.cn
电话: 027-83662894
收稿日期: 2003-08-07
修回日期: 2003-08-20
接受日期: 2003-09-01
在线出版日期: 2003-10-15
Abstract
目的

研究丙型肝炎病毒核糖体插入位点启动翻译蛋白质功能, 构建双顺反子真核表达载体.

方法

逆转录PCR(RT-PCR)扩增丙型肝炎基因组中核糖体插入位点序列(IRES), 定向克隆到pcDNA3-S质粒多克隆酶切位点中. 在IRES下游克隆乙型肝炎病毒核心基因, 测序鉴定后获得的质粒经脂质体转染hepG2细胞, 间接免疫荧光染色和Western-blot检测.

结果

在间接免疫荧光染色后, 荧光显微镜下可见乙型肝炎病毒S基因和核心基因表达. 转染细胞破碎后免疫沉淀检测和图像分析表明, 两种基因有相似的表达量.

结论

人为截断HCV 5'NTR区17个碱基, 并不影响IRES对下游基因蛋白质翻译, 为成功构建了含丙型肝炎病毒 IRES的双顺反子表达载体打下基础.

Keywords: N/A