乙型肝炎病毒慢性感染者血清中不同类型病毒转录体的检测及其意义

图2 HBx 转录体 RT-PCR的特异性, 与其C区和S区RT-PCR反应结果的对照及其3'端结构. 15例HCC患者血清(A-Q), 9例HBsAg(HBs) 阳性, 6例阴性(底部I), P和Q为各种反应的对照. 应用其核酸提取物分别进行HBx区DNA PCR(系列A), 全长型(fRNA; 系列G)和顿挫型病毒转录体(trRNA; 系列H)半巢式锚定RT-PCR反应; 相同的标本经DNase I消化后检测病毒DNA HBx区(系列B), 病毒转录体 HBx区(系列C和D), C区(系列E)和S区(系列F). 系列A, PCR检测病毒DNA, 引物对txs3/xas1, 产物长度为235 bp, 采用DNase I消化过的来自1例(trRNA) 阳性HCC组织的RNA提取物(P)和trRNA cDNA质粒pMT9T41A(Q) 作为对照, 溴化乙锭(EB)染色显示. 系列B, 半巢式PCR检测病毒DNA, 外引物对为txs3/xas1, 内引物对为tx1/xas1, 产物长度为215 bp, 对照同系列A. 系列C和D, 逆转录反应后进行-轮(系列C, 引物txs3/xas1, 长度235 bp)或两轮PCR(系列D, 引物对为txs3/xas1和tx1/xas1, 长度为215 bp) 检测病毒转录体HBx区段, 对照同于系列A, 分别经EB染色(上)或应用P32-ATP标记的寡核苷酸探针(1561+)进行Southern杂交(下)显示扩增产物. 系列E和F, 逆转录反应后进行两轮PCR检测病毒转录体C区段(系列E, 引物对为couts/coutas和cins/cinas, 产物长度为172 bp)和S区段(系列F, 引物对为souts/soutas和sins/sinas, 长度为143 bp), P为trRNA cDNA质粒pMT9T41A, Q分别为C区cDNA质粒pd4(系列E)和来自1例阳性肝硬变组织[14]的RNA提取物(系列F), EB染色显示. 系列G和H, 逆转录反应后进行两轮锚定PCR检测病毒转录体3'端结构fRNA(系列G, 产物长度为370 bp)和trRNA(系列H, 长度为245 bp), 分别经EB染色或Southern杂交显示扩增产物(详见图1). 每个凝胶的左侧以bp 数显示DNA标准物.