人胃癌细胞肿瘤相关基因的表达与甲基化调控

表1 RT-PCR各引物序列、反应条件和基因登录号

引物	正义(5'→3')	反义(5'→3')	反应条件及产物大小	GeneBank Number
β-Actin	GGC ATC GTG	GCT GGA AGG	94℃ 5 min, 92℃ 40 s, 58℃ 40 s, 72℃ 50 s	BC023204
	ATG GAC TCC G	TGG ACA GCG A	30 cycle, 72℃ 5 min; 612 bp
p16INK4A	CCC GCT TTC	TTA TTT GAG	94℃ 5 min, 94℃ 1 min, 58℃ 1 min, 72℃	L27211
	GTA GTT TTC AT	CTT TGG TTC TG	1 min, 30 cycle, 72℃ 5 min; 355 bp
p21WAF1	CCC AGT GGA	ACT GCA GGC	94℃ 5 min, 92℃ 40 s, 58℃ 40 s, 72℃	S 67388
	CAG CGA GCA GC	TTC CTG TGG GC	1 min, 30 cycle, 73℃ 5 min; 450 bp
p53	CAG CCA AGT CTG	CTA TGT CGA AAA	94℃ 5 min, 94℃ 30 s, 65℃ 1 min, 72℃	XM 008679
	TGA CTT GCA CGT AC	GTG TTT CTG TCA TC	1 min, 30 cycle, 72℃ 5 min; 292 bp
c-myc	CCA ACA GGA	CTC GGT CAC CAT	94℃ 5 min, 94℃ 1 min, 52℃ 1 min	V00568
	GCT ATG ACC TC	CTC CAG CT	72℃ 1 min, 30 cycle, 72℃ 5 min; 290 bp
c-Ha-ras	CAA GAG TGC	CCG GAT CTC ACG	95℃ 5 min, 95℃ 1 min, 63℃ 1 min	BC006499
	GCT GAC CAT CC	CAC CAA C	72℃ 1 min, 30 cycle, 72℃ 5 min; 420 bp

表2 甲基化测序引物序列及PCR扩增条件

引物	正义(5'→3')	反义 (5'→3')	反应条件及产物大小	GeneBank Number
p16INK4A SecA1	GTA GGT GGG GAG	TCT AAT AAC CAA CCA	95℃ 5 min, 95℃ 1 min, 60℃ 1 min	AF022809
	GAG TTT AGT T	ACC CCT CC	72℃ 1 min, 40 cycle, 72℃ 5 min; 280 bp
p16INK4A SecA2	GGG GGA GAT	CCC TCC TCT	95℃ 5 min, 95℃ 1 min, 60℃ 1 min	AF022809
	TTA ATT TGG	TTC TTC CTC	72℃ 1 min, 40 cycle, 72℃ 5 min; 190 bp
c-myc meth-MSP	TAG AAT TGG	CGA CCG AAA ATC	95℃ 5 min, 95℃ 1 min, 56℃ 2 min	AF002859
(exon1-2)	ATC GGG GTA AA	AAC GCG AAT	72℃ 3 min, 5 cycle, 95℃ 30 s; 131 bp 56℃ 30 s, 72℃ 1 min, 35 cycle, 72℃ 5 min
c-myc unme-MSP	TAG AAT TGG	CCA ACC AAA AAT	95℃ 5 min, 95℃ 1 min, 56℃ 2 min; 132 bp	AF002859
(exon1-2)	ATT GGG GTA AA	CAA CAT GAA T	72℃ 3 min, 5 cycle; 95℃ 30 s, 56℃ 30 s, 72℃ 1 min, 35 cycle; 72℃ 5 min

表3 5-aza-dC 24h对HGC-27和MKN-45细胞周期的影响(mean±SD, %)

分组	G0/G1	S	G2/M
HGC-27对照组	43.7±2.78	46.8±5.95	11.5±4.98
2 μmol/L 5-aza-dC	47.5±1.36	39.4±0.51	13.1±1.25
5 μmol/L 5-aza-dC	51.8±1.61a	31.3±1.60a	17.0±0.38a
10 μmol/L 5-aza-dC	51.4±2.34a	32.5±1.91a	17.1±3.13a
MKN-45对照组	70.4±0.75	19.3±0.15	10.3±0.67
2 μmol/L 5-aza-dC	63.6±7.21	23.9±5.43	12.5±1.79
5 μmol/L 5-aza-dC	63.0±6.29	24.4±5.16	12.6±1.36
10 μmol/L 5-aza-dC	69.9±3.14	19.3±2.90	10.9±1.17

^aP<0.05 vs 对照组.