修回日期: 2023-09-08
接受日期: 2023-09-26
在线出版日期: 2023-10-28
胆管癌(cholangiocarcinoma, CC)是发源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,由于起病隐匿, 预后较差, 尚缺乏有效根治手段. 解整合素-金属蛋白酶(disintegrin and metalloproteinase, ADAM)33在肿瘤、炎症的发生发展中发挥重要作用.本研究观察了C ADAM33 rs678881及rs2853209与CC的易感性的关系.
探讨ADAM33基因rs678881、rs2853209单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与胆管癌的易感性的关系.
选取2017-01/2020-06期间于我院诊治的胆管癌手术患者212例作为研究组, 以同期在我院体检的健康查体者186例作为对照组, 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测研究对象血清中ADAM33基因rs678881及rs2853209位点的基因型, 采用酶联免疫吸附法检测血清可溶性细胞间分子-1(soluble intercellular molecule-1, sICAM-1)水平, 电化学发光法检测血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、癌细胞表面抗原(cancer cell surface antigen, CA19-9)水平.
研究组的ADAM33 rs678881 GC及rs678881 CC的基因分布频率较对照组高(P<0.05). 研究组的ADAM33 rs678881C等位基因分布频率较对照组高(P<0.05). 研究组与对照组在ADAM33 rs2853209的基因多态性方面比较无显著性差异. 研究组患者CA19-9、sICAM-1及CEA水平显著高于对照组, 差异具有统计学意义(P<0.05). ADAM33 rs678881GG、GC、CC基因型患者的CA19-9、sICAM-1及CEA水平依次升高, 各基因型之间水平比较差异具有统计学意义(P<0.05).
ADAM33 rs678881 GC、CC基因型及C等位基因增加胆管癌的易感性及血清肿瘤标志物的水平, 并可能参与了疾病的进展.
核心提要: 目前认为胆管癌(cholangiocarcinoma, CC)的发病与肝炎、糖尿病、吸烟、饮酒、基因多态性、肥胖等多种因素有关. 研究发现, 胆管癌组织中(disintegrin and metalloproteinase, ADAM)33蛋白表达显著升高, 且与预后不良有关. ADAM33 rs678881 GC、CC基因型及C等位基因增加胆管癌的易感性及血清肿瘤标志物的水平, 可能参与了CC的病理进程.
引文著录: 邱雷, 危贵君. 解整合素-金属蛋白酶33基因多态性与胆管癌及血清肿瘤标志物水平的相关性研究. 世界华人消化杂志 2023; 31(20): 871-876
Revised: September 8, 2023
Accepted: September 26, 2023
Published online: October 28, 2023
Cholangiocarcinoma (CC) is a malignant tumor originating from bile duct epithelial cells. Due to its insidious onset and poor prognosis, effective radical treatment is still lacking. Disintegrin and metalloproteinase (ADAM) 33 plays an important role in the occurrence and development of tumors and inflammation. The relationship between the ADAM33 gene polymorphisms rs678881 and rs2853209 and susceptibility to CC remains to be investigated.
To investigate the relationship between the ADAM33 gene single nucleotide polymorphisms (SNPs) rs678881 and rs2853209 and susceptibility to CC.
Two hundred and twelve patients undergoing surgery for CC at our hospital from January 2021 to June 2022 were selected as a study group, and 186 healthy cases who underwent physical examination at our hospital during the same period were selected as a control group. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism was used to detect the genotypes of ADAM33 gene rs678881 and rs2853209. Serum sICAM-1 level was detected by enzyme-linked immunosorbent assay, and serum carcinoembryonic antigen (CEA) and carbohydrate antigen 19-9 (CA19-9) levels were detected by electrochemiluminescence method.
The gene distribution frequency of ADAM33 rs678881 GC and rs678881 CC in the study group was higher than that of the control group (P < 0.05). The frequency of ADAM33 rs678881 C allele distribution in the study group was also higher than that of the control group (P < 0.05). There was no significant difference between the study group and the control group in the genetic polymorphism of ADAM33 rs2853209 (P > 0.05). The levels of CA19-9, sICAM-1, and CEA in the study group were significantly higher than those of the control group (P < 0.05). The levels of CA19-9, sICAM-1, and CEA in patients with ADAM33 rs678881GG, GC, and CC genotypes increased sequentially, and the differences in their levels between the genotypes were statistically significant (P < 0.05).
ADAM33 rs678881 GC and CC genotypes and C allele increase the susceptibility to CC and the levels of serum tumor markers, and may be related to the progression of the disease.
- Citation: Qiu L, Wei GJ. Association of disintegrin-metalloproteinase 33 gene polymorphisms with cholangiocarcinoma and serum tumor marker levels. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2023; 31(20): 871-876
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v31/i20/871.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v31.i20.871
胆管癌(cholangiocarcinoma, CC)是发源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤, 根据病灶的解剖部位可分为肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)和肝外胆管癌. ICC的恶性程度较高, 发病隐匿, 约占胆管癌的十分之一, 患者预后差[1]. 目前认为其发病与肝炎、糖尿病、吸烟、饮酒、基因多态性、肥胖等多种因素有关. 由于CC临床症状不典型, 早期发现较为困难, 且病情发展迅速, 尚缺乏有效根治手段, 手术、放疗及化疗等常规抗肿瘤的远期疗效不佳, 易导致术后的复发及转移, 预后较差[2,3]. 因此, 寻找新的诊疗手段具有重要临床意义.
解整合素-金属蛋白酶(disintegrin and metallopro-teinase, ADAM)33为ADAM家族的一员[4], 能够通过其所拥有的解体蛋白及金属蛋白酶结构域加速细胞-细胞-基质之间的相互作用, 在肿瘤、炎症的发生发展中发挥重要作用[5,6]. 张国华等[7]研究显示, 胆管癌组织中ADAM33蛋白表达显著升高, 且与预后不良有关. 马兰红等[8]研究发现携带ADAM33 rs678881GC、CC基因型的支气管哮喘患儿血浆白细胞介素-4、免疫球蛋白E水平较高而γ-干扰素水平较低, 且消化道反应的发生率高, ADAM33 rs678881GC、CC基因型可能参与了儿童支气管哮喘的发展. 故本研究观察了CC患者肿瘤组织中ADAM33 rs678881及rs2853209基因SNP的表达水平并分析ADAM33 rs678881及rs2853209与CC的易感性.
选取2017-01/2020-06期间于我院诊治的胆管癌手术患者212例作为研究组, 其中男性109例、女性103例, 年龄(65.2±16.4)岁; 肿瘤部位: 肝内胆管癌患者114例, 肝外胆管癌患者98例; 分化程度: 高、中、低分化者分别为17例、139例及56例; 有淋巴结转移者136例; 术后1年复发或出现进展者71例; 临床分期: Ⅰ/Ⅱ期73例, Ⅲ/Ⅳ期139例. 纳入标准: (1)所有患者均行胆管癌切除手术, 且术后均经病理组织学确诊为胆管癌; (2)术前均未进行抗肿瘤治疗; (3)临床资料完整. 以同期在我院体检的健康查体者186例作为对照组, 患者均无合并免疫性疾病、无严重心肺肝肾疾病. 其中, 男性97例、女性89例, 年龄(63.3±17.5)岁. 两组病例的性别、年龄基线资料比较无差异, 具有可比性. 本研究已获得本院医学伦理委员会审批.
1.2.1 基因序列的SNP检测: 患者入院后即抽取空腹肘部静脉血, 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)法进行SNP的检测. 采用贝克曼公司生产的基因组DNA提取试剂盒进行外周血DNA提取, 严格按照试剂盒说明书进行操作, 鉴定DNA的浓度及纯度并采用核酸电泳检测序列的完整性, 进行PCR反应, ADAM33 rs678881上游引物5′-TTCAAAGCCTCCCCCTCTCATC-5′, 下游引物5′-TGATCCAGGAAAAGCCACAGC-3′; ADAM33 rs2853209上游引物5′-AGGGTGAGGCAGCCAGCT-3′, 下游引物5′-CTTCCTCAGTGGCCTCCCAGTCAATCG-3′, 引物由上海宝成生物技术有限公司合成. PCR总反应体系25 μL. PCR反应条件: 95 ℃下预变性3 min, 94 ℃变性30 s, 60 ℃退火45 s, 72 ℃下延伸30 s, 72 ℃延伸7 min, 共45个循环. 取8 μLPCR产物, 加入2 U限制性核酸内切酶I(restriction endonuclease Ⅰ, EcoR Ⅰ), 用双蒸水补足总反应体系至10 μL, 37 ℃水浴4 h, 进行酶切反应, 反应结束后进行凝胶电泳并鉴定基因型.
1.2.2 肿瘤标志物的检测: 患者入院后即抽取空腹肘部静脉血4 mL. 采用酶联免疫吸附法检测血清sICAM-1水平, 电化学发光法检测血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、癌细胞表面抗原(cancer cell surface antigen, CA19-9)水平.
统计学处理 采用SPSS 22.0软件进行数据的分析及计算, 计量资料以mean±SD表示, 采用单因素方差分析; 不同基因型之间变异发生率的比较χ2检验, 均值比较采用t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义.
研究组ADAM33 rs678881 GC、CC的基因分布频率显著高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05), 提示携带ADAM33 rs678881GC、CC基因型的人群更易发生胆管癌. 研究组ADAM33 rs678881C等位基因分布频率显著高于对照组(P<0.05). 两组ADAM33 rs2853209各基因型及等位基因分布频率比较, 差异均无统计学意义. 提示携带ADAM33 rs678881 C等位基因型的人群更易发生胆管癌. 见表1.
| 基因位点 | 基因型或等位基因 | 研究组(n = 212) | 对照组(n = 186) | OR值(95%CI) | P |
| rs678881 | 基因型 | ||||
| GG | 86(40.57) | 123(66.13) | 1.00(Ref) | - | |
| GC | 78(36.79) | 47(22.17) | 2.15(1.12, 3.88) | 0.042 | |
| CC | 48(22.64) | 16(8.60) | 1.63(0.47, 5.75) | 0.020 | |
| 等位基因 | |||||
| G | 254(59.91) | 272(73.12) | 1.00(Ref) | - | |
| C | 170(40.09) | 100(26.88) | 1.79(0.97, 2.81) | 0.013 | |
| rs2853209 | 基因型 | ||||
| AA | 78(36.79) | 59(31.72) | 1.00(Ref) | - | |
| AT | 75(35.38) | 63(33.87) | 0.57(0.44, 1.23) | 0.835 | |
| TT | 59(27.83) | 74(40.44) | 0.89(0.61, 2.35) | 0.961 | |
| 等位基因 | |||||
| A | 241(56.84) | 211(56.72) | 1.00(Ref) | - | |
| T | 183(43.16) | 161(43.28) | 063(0.57, 1.51) | 0.794 |
研究组患者CA19-9、sICAM-1及CEA水平显著高于对照组, 差异具有统计学意义(P<0.05), 提示胆管癌患者血清CA19-9、sICAM-1及CEA等肿瘤标志物水平显著增高. 见表2.
| 基因型 | n | CA19-9(ng/mL) | sICAM-1(IU/mL) | CEA(μg/L) |
| 研究组 | 212 | 154.25±64.17 | 984.25±417.35 | 5.95±3.66 |
| 对照组 | 186 | 26.33±10.15 | 166.58±12.09 | 2.57±1.04 |
| t | 26.890 | 26.706 | 12.206 | |
| P | <0.001 | <0.001 | <0.001 |
ADAM33 rs678881GG、GC、CC基因型患者的CA19-9、sICAM-1及CEA水平依次升高, 各基因型之间水平比较差异具有统计学意义(P<0.05). rs2853209患者的CA19-9、sICAM-1及CEA水平各基因型之间比较, 差异均无统计学意义. 在ADAM33 rs678881患者中, 不同基因型患者的血清肿瘤标志物水平不同, 尤以CC基因型患者的水平最高. 见表3.
| 基因型 | n | CA19-9(ng/mL) | sICAM-1(IU/mL) | CEA(μg/L) |
| rs678881 | ||||
| GG | 86 | 121.73±75.28 | 912.69±193.72 | 5.62±3.14 |
| GC | 78 | 167.26±83.36a | 1024.25±209.36a | 6.79±4.68a |
| CC | 48 | 180.62±92.44ab | 1205.63±227.31ab | 9.81±5.42ab |
| F | 10.040 | 30.743 | 14.627 | |
| P | 0.000 | 0.000 | 0.000 | |
| rs2853209 | ||||
| AA | 78 | 151.72±50.88 | 911.27±112.41 | 5.37±3.08 |
| AT | 75 | 153.21±68.37 | 938.69±131.79 | 5.93±4.46 |
| TT | 59 | 159.60±57.39 | 959.21±127.35 | 5.82±4.77 |
| F | 0.289 | 2.502 | 0.432 | |
| P | 0.750 | 0.084 | 0.650 |
根据ADAM33基因rs678881、rs2853209与胆管癌易感性的关系研究发现, 携ADAM33 rs678881 C等位基因型的人群更易发生胆管癌, 因此将ADAM33 rs678881位点的GC和CC基因型合并, 来比较GC/CC基因型、CC基因型与胆管癌临床病理的关系. 在212例胆管癌患者中, GC/CC基因型在性别、年龄分层、肿瘤部位、分化程度、方面的发病频率比较, 差异无统计学意义. 在临床TNM分期Ⅰ/Ⅱ型患者中GC/CC基因型频率显著低于Ⅲ/Ⅳ期患者, 差异具有统计学意义(P<0.05). 在有淋巴结转移的患者组中GC/CC基因型频率显著高于无淋巴结转移患者, 差异具有统计学意义(P<0.05). 在有复发或进展的患者组中GC/CC基因型频率显著高于无复发或无进展患者, 差异具有统计学意义(P<0.05). 提示ADAM33基因rs678881位点GC/CC基因型可能是胆管癌发病的危险因素, 与胆管癌的淋巴结转移、复发或进展和临床 NM分期晚关系密切. 见表4.
| 项目 | 基因型 | χ2 | P | ||
| GC/CC(n = 164) | GG(n = 48) | ||||
| 性别 | 男 | 83 | 26 | ||
| 女 | 81 | 22 | 0.188 | 0.665 | |
| 年龄 | ≥55岁 | 79 | 30 | ||
| <55岁 | 85 | 18 | 3.052 | 0.081 | |
| 肿瘤部位 | 肝内 | 85 | 29 | ||
| 肝外 | 79 | 19 | 1.102 | 0.294 | |
| 分化程度 | 高 | 12 | 5 | ||
| 中 | 104 | 35 | |||
| 低 | 48 | 8 | 3.189 | 0.203 | |
| 淋巴结转移 | 有 | 115 | 21 | ||
| 无 | 49 | 27 | 11.229 | 0.001 | |
| 复发或进展 | 有 | 40 | 31 | ||
| 无 | 124 | 17 | 6.873 | 0.009 | |
| 临床分期 | Ⅰ/Ⅱ | 47 | 26 | ||
| Ⅲ/Ⅳ | 117 | 22 | 10.701 | 0.001 | |
所有患者均连续3年, 失访5例, 失访率为2.35%. 其中, GC/CC基因型患者中位生存时间为17.6 mo, 3年生存率为21.7%; 而GG基因型患者中位生存时间为23 mo, 3年生存率为33.0%. GC/CC基因型患者的中位生存时间及3年生存率均显著低于GG基因型患者. 提示ADAM33基因rs678881GC/CC基因型可作为判断胆管癌雨后的重要指标.
CC多为源自胆管黏膜上皮细胞的恶性肿瘤, 治疗仍以外科手术为主[9,10], 由于早期临床症状不典型, 往往易漏诊, 由于手术根治率不高, 术后缺乏有效治疗药物, 5年生存率不足30%. 因此, 探索胆管癌的发病机制, 寻找早期有效的治疗药物十分重要.
ADAM33基因是新近研究较多基因, 研究发现其与支气管哮喘发生发展有关, 可能是易感基因[11], 其存在特殊的结构域, 包括信号肽、金属蛋白酶、解整合素等, 性质较为保守, 通过其变化能够参与各种信号途径的转导. 研究表明[12,13], ADAMs家族蛋白与肿瘤细胞的侵袭及转移过程密切相关, 可能是导致肿瘤复发及转移的重要因素. 有研究发现[14], ADAM33在胃癌组织中表达升高, 能够促进胃癌细胞的增殖及迁移. 张国华等[7]研究发现, 胆管癌组织中ADAM33蛋白表达上调, 且与预后不良有关, 但ADAM33基因的单核苷酸多态性与胆管癌发病的相关性尚未见报道.
本研究结果显示, 研究组的ADAM33 rs678881 GC、CC的基因分布频率显著高于对照, 提示携带ADAM33 rs678881GC、CC基因型的人群更易发生胆管癌. 研究组的ADAM33 rs678881C等位基因分布频率显著高于对照组, 提示携带ADAM33 rs678881C等位基因型的人群更易发生胆管癌. 而两组ADAM33 rs2853209各基因型及等位基因分布频率比较, 差异均无统计学意义. 提示ADAM33 rs2853209与胆管癌的发病相关性较小.
同时, 本研究还发现, ADAM33 rs678881GG、GC、CC基因型患者的CA19-9、sICAM-1及CEA水平依次升高, 各基因型之间水平比较差异具有统计学意义. 表明ADAM33基因rs678881的单核苷酸多态性能够反映胆管癌的恶性程度, 其可能参与了胆管癌的发展.
将含C等位基因和不含C等位基因分成两组, 研究不同基因型组与胆管癌临床病理的关系, 结果显示, 在 212例胆管癌患者中, GC/CC基因型和GG两组基因型在不同年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度组间分布中比较, 差异无显著性. 但GC/CC基因型频率在有淋巴结转移、TNM Ⅲ/Ⅳ期、有复发或进展组明显高于无淋巴结转移、TNM Ⅰ/Ⅱ期、无复发或进展组, 差异具有统计学意义. 提示GC/CC基因型可能与胆管癌的浸润和转移相关.
在为期3年的随访期中, GC/CC基因型患者3年生存率低于GG基因型患者, 说明AG/GG基因型可能时预测胆管癌预后的重要因素.
综上所述, ADAM33 rs678881GC、CC基因型及C等位基因与胆管癌的发病密切相关, 可能是易感基因, 而rs2853209基因多态性可能与胆管癌的易感性无关. 但由于本研究样本量较小, 研究时间较短, 并未进一步研究不同类型胆管癌中基因型的分布差异, 在下一步的研究中将加以验证.
胆管癌(cholangiocarcinoma, CC)是临床常见的恶性肿瘤之一, 其临床症状不典型, 往往预后较差. 胆管癌组织中(disintegrin and metalloproteinase, ADAM)33蛋白表达显著升高, 可能是导致CC预后不良的一个重要因素, 但其基因多态性与CC发病的相关关系研究相对较少.
本研究试图探讨遗传因素之基因多态性对与CC病情进展及预后之间的联系, 为CC患者的诊断及更有效治疗提供基因分型的依据.
本研究旨在通过对ADAM33基因进行分型, 分析ADAM33基因多态性与胆管癌及血清肿瘤标志物水平的相关性, 从而确定不同基因型的患者对CC的易感性, 为CC患者的诊断及治疗提供借鉴和依据.
本研究主要采用数据分析的方法, 分析CC患者ADAM33基因多态性与胆管癌及血清肿瘤标志物水平的相关性, 统计并分析ADAM33基因型与CC患者临床病理及预后的关系, 从而阐述ADAM33基因型对CC患者易感性的影响.
研究组的ADAM33 rs678881 GC及rs678881 CC的基因分布频率较对照组高. 研究组的ADAM33 rs678881C等位基因分布频率较对照组高. GC/CC基因型频率在有淋巴结转移、TNM Ⅲ/Ⅳ期、有复发或进展组明显高于无淋巴结转移、TNMⅠ/Ⅱ期、无复发或进展组.
ADAM33 rs678881GC、CC基因型及C等位基因与CC的发病密切相关, 可能是易感基因, 参与了CC的病程进展.
本研究随访时间相对较短, 病例数较少, 且为单中心研究, 对于ADAM33引起CC的分子机制不明确. 下一步将对这些患者做进一步的跟踪随访, 分析在更长的时间段内ADAM33与CC复发的关系及具体作用机制.
学科分类: 胃肠病学和肝病学
手稿来源地: 浙江省
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科学编辑:张砚梁 制作编辑:张砚梁
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