按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦平滑肌RhoA/ROCK信号表达的影响

摘要

目的: 通过固定循经取穴配伍以不同部位选穴进行对比研究, 以糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis, DGP)大鼠为观察对象, 研究不同按部选穴针刺治疗对DGP大鼠RhoA/ROCK信号的表达差异, 探讨按部选穴是影响腧穴配伍效应的主要影响因素.

方法: 将60只♂SPF级SD大鼠, 适应性喂养1 wk后, 随机分为空白对照组、模型组、足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组, 每组12只. 除空白对照组12只外, 其余48只大鼠运用链脲佐菌素腹腔注射造糖尿病模型, 普通喂养8 wk后建立DGP大鼠模型, 针刺治疗4 wk, 于13 wk末墨汁灌胃后处死, 取胃窦组织. 运用Western blot检测胃窦平滑肌组织Ras同源物基因组成员A(Ras homolog gene family, member A, RhoA)、Rho蛋白相关卷曲螺旋激酶(Rho-associatedc, oiled-coil containing protein kinase, ROCK)、肌球蛋白磷酸酶靶亚单位1(myosin phosphatase target subunit 1, MYPT1)、p-MYPT1蛋白的表达量; 应用免疫组织化学检测胃窦平滑肌组织RhoA蛋白平均灰度值改变.

结果: 与空白对照组相比, 模型组的小肠推进率、胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白的表达量明显降低(P<0.01), 胃窦平滑肌组织RhoA灰度值表达升高(P<0.05). 与模型组相比, 足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组的小肠推进率和胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白的表达量明显升高(P<0.05), 胃窦平滑肌组织RhoA灰度值表达均具有降低的趋势(P<0.05). 与足三里+中脘组相比, 足三里+内关、足三里+非经非穴组胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白的表达量降低(P<0.05), 胃窦平滑肌组织RhoA 灰度值表达升高(P<0.05). 在治疗期间, 与模型组相比, 足三里+中脘组的饮食量明显降低(P<0.05).

结论: 针刺能通过上调RhoA/ROCK信号的表达来促进胃平滑肌收缩, 改善DGP的症状; 证实按部选穴是影响腧穴配伍效应的重要因素, 且配伍局部穴明显优于配伍远端穴及非经非穴.

关键词: 腧穴配伍; 按部选穴; 糖尿病胃轻瘫; 针刺治疗; RhoA/ROCK信号通路

核心提示: RhoA/ROCK信号通路是一种Ca²⁺非依赖性的平滑肌收缩调节机制, 针刺能通过促进胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK等蛋白表达, 增强磷酸化肌球蛋白轻链的水平, 改善糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis)的症状. 各配伍组间疗效差异证实不同的按部选穴是影响腧穴配伍效应的重要因素, 且配伍局部穴疗效最佳.

Effect of acupuncture at different acupoints on RhoA/ROCK signaling pathway in gastric antral smooth muscle tissue of rats with diabetic gastroparesiws

Xiao-Li Chen, Li Liu, Qi-Qi Wen, Ping Li, Yan Wang, Xin-Ran Wei, Zeng-Hui Yue

Xiao-Li Chen, Li Liu, Qi-Qi Wen, Ping Li, Yan Wang, Xin-Ran Wei, Zeng-Hui Yue, College of Acupuncture and Moxibustion, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410007, Hu'nan Province, China

Supported by: the National Key Basic Research Development Program, No. 2014CB543102.

Correspondence to: Zeng-Hui Yue, Professor, College of Acupuncture and Moxibusion, Hu'nan University of Chinese Medicine, 113 Shaoshan Road, Changsha 410007, Hu'nan Province, China. 624755064@qq.com

Received: February 23, 2016
Revised: March 16, 2016
Accepted: March 23, 2016
Published online: August 18, 2016

Abstract

AIM: To observe the effect of acupuncture at different acupoints on the RhoA/ROCK signaling pathway in the gastric antrum of diabetic gastroparesis (DGP) rats.

METHODS: Sixty SD rats were randomly divided into a normal group, a model group, a Zusanli + Zhongwan group, a Zusanli + Neiguan, and a Zusanli + non-acupoint group, with 12 rats in each group. DGP was indueced by intraperitoneal injection of streptozotocin, followed by feeding for 8 wk. After 4 wk of treatment, the gastrointestinal transit rate was measured with black ink. The expression of RhoA protein and ROCK protein was detected by immunohistochemistry and Western blot.

RESULTS: Compared with the normal group, the model group showed a significant reduction in gastrointestinal transit rate and expression of RhoA, ROCK, MYPT1, and p-MYPT1 in gastric antral smooth muscle tissue and a significant increase in RhoA expression (P < 0.01), suggesting that DGP was successfully induced. Compared with the model group, the gastrointestinal transit rate and expression of RhoA, ROCK, MYPT1 and p-MYPT1 in gastric antrum tissue significantly increased in the Zusanli + Zhongwan, Zusanli + Neiguan and Zusanli + non-acupoint groups (P < 0.05). RhoA, ROCK, MYPT1 and p-MYPT1 expression was significantly higher in the Zusanli + Zhongwan group than in the Zusanli + Neiguan and Zusanli + non-acupoint groups (P < 0.05). RhoA expression in gastric antral smooth muscle tissue was significantly higher in the Zusanli + Neiguan and Zusanli + non-acupoint groups than in the Zusanli + Zhongwan group (P < 0.05). The dietary intake was significantly reduced in the Zusanli + Zhongwan group compared with the model group during the treatment period (P < 0.05).

CONCLUSION: Acupoint selection is an important factor to influence the effect of acupoint compatibility. Combination of local acupoints is obviously superior to the compatibility of distal acupoints and non-acupoint.

Key Words: Acupoint compatibility; Acupoint; Diabetic gastroparesis; Acupuncture; RhoA/ROCK signaling pathway

0 引言

糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis, DGP)于1958年最先由Kassander提出并描述其症状, 是糖尿病的常见慢性并发症之一, 临床多表现为腹胀、腹部不适、早饱、发作性呕吐等[1,2]. DGP的主要特点是胃窦无张力导致的胃扩张、平滑肌收缩力减低引起的胃蠕动减慢和排空延迟[3]. 但迄今为止, DGP发病机制不十分清楚, 可能与胃肠平滑肌变化、神经病变、高血糖、胃肠激素变化及Cajal间质细胞病变以及幽门螺杆菌感染等因素有关[4]. 实验研究[5,6]发现RhoA/ROCK信号通路是调节平滑肌收缩, 导致胃肠平滑肌收缩异常、影响胃动力的重要信号通路, DGP大鼠胃窦平滑肌组织中RhoA水平及蛋白表达明显下调, 使得其下游的ROCK对肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase, MLCP)活性的抑制作用减弱, 导致DGP大鼠胃窦平滑肌的收缩能力减弱, 出现胃排空延迟等胃动力异常.

针灸治疗DGP取得较为满意临床疗效, 不仅能明显改善临床症状, 且治疗后空腹血糖亦得到改善, 不良反应小[7,8], 相关实验也证实针刺对胃肠运动具有良性的双相调节作用[9]. 但当前针灸治疗DGP的腧穴配伍方法并未统一且缺乏相关的机制研究[10]. 因此, 我们建立DGP模型, 固定循经选穴, 观察不同的按部选穴, 治疗本病的疗效差异, 探讨按部选穴针刺对DGP大鼠胃窦平滑肌RhoA/ROCK信号表达的调节机制, 证实按部选穴是腧穴配伍效应的影响因素.

1 材料和方法

1.1 材料

SPF级成年♂SD大鼠60只, 体质量200-220 g, 由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供, 合格证号: SYXK2013(湘)-0005. 均经血糖仪检测, 血糖正常者入选. 饲养于湖南中医药大学实验动物中心SPF级实验动物房, 饲养温度22 ℃-25 ℃, 湿度40%-60%, 自然采光. 适应性喂养1 wk后, 采用随机法将大鼠分为空白对照组、模型组、足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组, 每组12只. 实验过程中对动物的处置和操作均遵守科技部颁发《关于善待实验动物的指导性意见》中有关规定. 链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)(美国Sigma公司, 批号015H 1492); TRIzol试剂盒(美国Invitrogen); 血糖仪及血糖试纸(美国强生公司稳易倍健型); 针灸针(苏州产华佗牌无菌针灸针, 0.30 mm×25 mm); SP试剂盒(北京中杉金桥生物公司, SP-9000); DAB显色试剂盒(北京中杉金桥生物公司, ZLI-9031); 抗Rho A一抗(工作浓度1:1000, Abcam公司)、抗ROCK一抗(工作浓度1:1000, SAB公司)、抗肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(myosin phosphatase target subunit 1, MYPT1)一抗(工作浓度1:1000, Cell Signaling Technology, Inc)、抗磷酸化p-MYPT1一抗(工作浓度1:1000, Cell Signaling Technology, Inc); OLYMPUS自动显微镜照相系统(日本)等.

1.2 方法

1.2.1 造模及评定: 将模型组、足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组大鼠禁食12 h, 将STZ溶入0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH 4.2, 4 ℃), 配制成2%浓度, 按55 mmol/kg于左下腹腔内一次性注射, 72 h后检测随机血糖, <16.7 mmol/L者予以相同方法再次注射后检测随机血糖; 空白对照组大鼠一次性注射等容量的0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液. 所有大鼠均予以普通饲料, 每日上午10:00定时喂养. 实验13 wk期间, 检测随机血糖<16.7 mmol/L者剔除实验. DGP模型成功标准[11]: 血糖>=16.7 mmol/L者; 观察大鼠一般情况(摄食量、饮水量、体质等)及大便性状与空白对照组有显著差异; 大鼠胃排空率及小肠推进率与空白组相比有显著差异.

1.2.2 各组干预: 穴位定位: 根据李忠仁主编《实验针灸学》"动物针灸穴位图谱"[12]及拟人对照法进行大鼠穴位定位: 中脘: 位于腹白线上, 约脐上20 mm. 足三里: 在膝关节下侧, 腓骨小头下缘5 mm处, 左右两侧各一. 内关: 前肢内侧, 离鼠腕关节约3 mm 左右的尺桡骨缝间. 非经非穴点: 肘内侧, 肘尖与腋窝连线中点.

空白对照组、模型组: 束缚于鼠板上, 每次30 min, 每日1次, 连续4 wk. 足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组: 取两侧相应穴位, 予每日针刺干预, 连续4 wk. 针刺深度为0.3-0.5 cm; 采用常规进针法后留针30 min, 每10 min行针一次, 进行提插、捻转, 行平补平泻手法, 提插的幅度为0.3-0.5 cm, 频率为60-90次/min之间, 提插捻转幅度和频率均采用均等的手法. 第30分钟在行针结束后出针. 在治疗期间, 均采用纱布将大鼠四肢固定于鼠板上, 松紧适中, 不定期于捆绑处用络合碘消毒, 治疗期间大鼠四肢并未因长时间束缚而出现缺血坏死情况, 四肢功能正常.

1.2.3 大鼠一般情况观察及检测: 造模成功后, 每周以尾静脉采血, 用血糖仪和血糖试纸测定血糖值; 每周测体质量; 观察大鼠24 h饮水量、饮食量, 观察大鼠皮毛、精神状况、粪便性质等. 食量测定: 每天上午10: 00予每笼大鼠300 g普通饲料, 次日喂食前称质量即剩余饲料质量, 300 g减去剩余饲料质量即为每笼大鼠每日进食量. 血糖测定: 每周以尾静脉采血, 用血糖仪和血糖试纸测定血糖值. 墨汁灌胃法测小肠推进率: 末次治疗后, 禁食24 h, 各组大鼠均经口按1 mL/100 g体质量用量予黑色墨水灌胃, 20 min水合氯醛麻醉后予心尖采血, 处死后打开腹腔, 用镊子轻轻提取上端至幽门、下端至回盲部的肠管, 并置于托盘上, 轻轻将小肠拉成直线, 用量尺测量胃肠推进指标, 胃肠推进指标通过以下公式计算得出: 小肠推进率 = 墨水前端至幽门扩约肌距离(cm)/幽门括约肌至小肠末端距离(cm)×100%.

1.2.4 免疫组织化学法测定RhoA蛋白表达: 取大鼠胃窦组织1 cm×1 cm用PBS冲洗、40 g/L多聚甲醛固定, 常规脱水、包埋、切片, 经过脱蜡、抗原修复、过氧化氢灭活、血清封闭. 滴加RhoA一抗(1:50)后4 ℃过夜, 次日复温漂洗后加入二抗, 37 ℃孵育30 min. 漂洗后DAB显色2-4 min, 苏木复染, 常规脱水透明, 封片, 显微镜观察. 胞膜上或胞质内出现棕黄色片状或颗粒状物为阳性反应. 高倍镜下(400×)每张切片随机取3个视野, 用OLYMPUS医学图文分析系统分析取其平均值作为该切片指标表达的平均灰度值.

1.2.5 Western blot测定RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白表达: 提取胃窦平滑肌组织蛋白, 采用BCA法定量蛋白浓度, 80 μg蛋白/泳道行SDS-PAGE凝胶电泳分离总蛋白, 随后100 V恒压将蛋白转至硝酸纤维素膜, 室温下5%脱脂牛奶封闭2 h, 分别加入抗RhoA一抗、抗ROCK一抗、抗MYPT1一抗、抗p-MYPT1一抗4 ℃孵育过夜, 加入二抗, ECL化学发光法显影. 进行凝胶图像分析, 将胶片进行扫描存档, 采用Quantity One4.4.0软件分析, 以RhoA、ROCK、MYPT1和p-MYPT1的灰度比值表示RhoA、ROCK、MYPT1和p-MYPT1蛋白的相对表达量.

统计学处理 所以数据采用SPSS17.0统计软件进行统计分析, 正态分布资料用mean±SD表示. 经检验满足正态性及方差齐性, 采用单因素方差分析进行多组间比较, 用LSD法进行多重比较; 不满足方差齐性, 用Tamhane T²检验. 偏态分布资料用中位数(M)和四分位数间距(QR)表示, 组间比较用秩和检验. 以P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 大鼠一般情况

实验期间, 空白对照组大鼠精神状态可, 目光有神, 活动正常, 反应灵敏, 饮食正常, 皮毛有光泽, 大小便无特殊改变. 模型组、足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组大鼠在造模3 d后出现多饮、多食、多尿, 在第4周开始出现精神不佳、活动反应迟缓, 造模第6周是出现皮毛泛黄疏松无光泽, 形体消瘦, 大便性状改变, 气味难闻, 腹部膨隆. 死亡情况: 空白对照组1只、模型组3只、足三里+中脘组2只、足三里+内关组2只、足三里+非经非穴组3只.

2.2 治疗期间各组大鼠饮食量

与空白组比较, 模型组食量明显增多(P<0.05); 与模型组比较, 足三里+中脘组饮食量减低(P<0.05); 与足三里+中脘组比较, 足三里+内关组、足三里+非经非穴组饮食量增多(P<0.05)(图1).

图1 治疗期间各组大鼠饮食变化比较. A: 治疗期间各组大鼠饮食变化曲线图; B: 各组大鼠治疗期间饮食量变化比较. ^aP<0.05 vs 空白组; ^cP<0.05 vs 模型组; ^eP<0.05 vs 足三里+中脘组.

2.3 墨汁灌胃法检测DGP大鼠胃肠推进率

与空白对照组比较, 模型组大鼠胃肠推进率明显减低(P<0.05), 结合大鼠的一般情况改变说明造模成功; 足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组与模型组比较胃肠推进率明显升高(P<0.05), 三组间无明显差异(图2).

图2 各组大鼠治疗结束后胃肠推进率的比较. ^aP<0.05 vs 空白组; ^cP<0.05 vs 模型组.

2.4 免疫组织化学法检测DGP大鼠胃窦平滑肌组织RhoA蛋白表达

与空白对照组比较, 模型组大鼠胃窦平滑肌RhoA蛋白表达灰度值明显升高(P<0.01); 与模型组比较, 足三里+中脘组、足三里+内关组大鼠胃窦平滑肌RhoA蛋白表达灰度值均降低(P<0.01); 与足三里+中脘组比较, 足三里+内关组和足三里+非经非穴组大鼠胃窦平滑肌 RhoA蛋白表达灰度值表达均上升(P<0.05). 与足三里+内关组比较, 足三里+非经非穴组大鼠胃窦平滑肌RhoA蛋白表达灰度值升高趋势, 两组之间无差异(P>0.05)(图3).

图3 RhoA蛋白表达在胃窦组织中的免疫组织化学情况. A: 空白对照组(×400); B: 模型组(×400); C: 足三里+中脘组(×400); D: 足三里+内关组(×400); E: 足三里+非经非穴组(×400); F: 各组大鼠胃窦组织RhoA蛋白表达平均灰度值. ^bP<0.01 vs 空白对照组; ^dP<0.01 vs 模型组; ^fP<0.01 vs 足三里+中脘组.

2.5 Western blot法检测DGP大鼠胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT1和p-MYPT1蛋白的相对表达量比较

与空白对照组比较, 模型组胃窦平滑肌RhoA、ROCK、MYPT1和p-MYPT1的蛋白的表达量均降低(P<0.01); 与模型组比较, 足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组胃窦平滑肌RhoA、ROCK和p-MYPT1的蛋白的表达量均升高(P<0.05); 与足三里+中脘组比较, 足三里+内关组和足三里+非经非穴组胃窦平滑肌RhoA、ROCK、MYPT1和p-MYPT1蛋白的表达量降低, 其中足三里+中脘和足三里+内关组的MYPT1蛋白表达无差异(P>0.05); 与足三里+内关组比较, 足三里+非经非穴组RhoA、ROCK和MYPT1蛋白的表达量均较低(P<0.05), 足三里+内关组与足三里+非经非穴组的p-MYPT1蛋白的表达量无差异(P>0.05)(图4).

图4 各组大鼠RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白相对表达量. A: RhoA、ROCK1、MYPT1和p-MYPT1的蛋白电泳条带; B: 不同按部选穴RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白相对表达量. 1: 空白对照组; 2: 模型组; 3: 足三里+非经非穴组; 4: 足三里+中脘组; 5: 足三里+内关组. ^bP<0.01 vs 空白组; ^cP<0.05, ^dP<0.01 vs 模型组; ^eP<0.05, ^fP<0.01 vs 足三里+中脘组; ^gP<0.05, ^hP<0.01 vs 足三里+内关组.

3 讨论

腧穴配伍[13]是基于中医理论, 在针灸选穴原则的指导下, 结合临床和腧穴主治特性, 选取两个以上作用相同的腧穴进行配伍, 发挥腧穴的协同增效作用, 以达到特定治疗效果, 提高临床疗效的一种方法. 根据文献研究[14,15], 腧穴配伍效应的影响因素主要为配伍方法、配伍效应、刺激手段及程度、时间因素、机体状态几个方面. 明·高武《针灸聚英·百症赋》曰: "百症俞穴, 再三用心", 《席弘赋也云》: "凡欲行针须审穴"; 选穴是影响腧穴配伍的关键因素, 其基本方式为按部选穴和循经选穴.

按部选穴可分为局部选穴与远端选穴. 根据腹部四区分法, 胃位于上腹部, 则脐水平线以上腹部腧穴为局部选穴, 四肢腧穴为远端选穴. 因此, 本研究固定循经选穴(足三里), 分别配以局部取穴(中脘), 远端取穴(内关), 并予以成都中医药大学所制定非经非穴点对照, 观察不同取穴治疗DGP疗效差异. 冀来喜等[16]研究发现内关、中脘、足三里穴对急性胃黏膜损伤有很好的逆转作用, 并命名为腧穴胃病方. 本课题组[17]通过分析近5年针灸治疗DGP的临床文献发现, 使用频率较高的经脉为足阳明胃经(所属腧穴总频数占29.45%), 使用频次最高的穴位分别是足三里、中脘、内关. 足三里为胃经之合穴, 胃之下合穴, 临床上常用于治疗治疗胃肠道疾病, 故循经选穴为足三里; DGP在中医病症中属"痞满"、"恶心"、"呕吐"、"反胃"、"积滞"等范畴, 其病位在胃, 中脘位于脐水平以上, 为胃之募穴, 是胃腑在胸腹面体表的投影, 能够直接作用于脏腑, 调节相应脏腑的机能, 故局部选穴为中脘; 内关穴位于腕关节上2寸, 属手厥阴心包经, 为本经络穴, 八脉交会穴通阴维脉, 临床上主要用于治疗心痛、心悸, 胸痛; 胃痛、呕吐、呃逆等症, 故远部选穴为内关. 则分组为空白组、DGP模型组、足三里+中脘组、足三里+内关组、足三里+非经非穴组.

RhoA/ROCK信号通路是一种Ca²⁺非依赖性的平滑肌收缩调节机制[18], RhoA活化后引起一系列下游效应器激活而发挥生理作用, 其中ROCK是目前发现的涉及平滑肌收缩功能中最重要的下游效应靶分子[19]. ROCK又称为Rho蛋白相关卷曲螺旋激酶, 是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的成员, ROCK主要通过磷酸化MLCP的调节亚单位MYPT1来调节平滑肌收缩[20]. 当上游的RhoA激活下游的ROCK后, 活化后的ROCK对MYPT-1肽链的697位苏氨酸进行磷酸化修饰为p-MYPT1, 抑制MLCP活性, 使得磷酸化肌球蛋白轻链(myosin light chain, MLC)水平提升, 促进平滑肌收缩. 因此, p-MYPT1的表达水平常被认为是ROCK活性的重要标志[21]. Ratz等[22]发现ROCK参与调节兔胃底平滑肌的收缩, Tomomassa等[23]研究发现在生理状态下ROCK抑制剂Y-27632可引起意识清醒大鼠胃平滑肌的收缩力急剧下降. 研究推测[24-26]DM胃轻瘫的发生可能部分与RhoA/ROCK信号通路被抑制有关, DM大鼠胃平滑肌组织中RhoA蛋白和ROCK蛋白、p-MYPT1蛋白表达减少, RhoA/ROCK信号转导途径表达下调. 侯东杰[27]通过采用活血化瘀中药上调RhoA/ROCK信号通路的表达, 促进DGP大鼠胃平滑肌收缩, 进而改善胃排空.

本研究结果显示, 针刺治疗能够促进DGP大鼠的胃肠功能的改善, 且针刺治疗能促进RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白表达水平升高, 不同配穴组上升水平有差异. 模型组的胃肠推进率较正常对照组减慢(P<0.01), DGP模型大鼠的胃窦组织RhoA与空白对照组比较明显减少(P<0.01), 与以往的实验研究结果一致[20], 说明DGP模型造模成功. 三组针刺干预组经治疗后胃肠推进率提高, 且胃窦平平滑肌组织的RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1表达水平虽低于空白对照组, 但较模型组有明显升高(P<0.01). 实验结果说明: (1)针刺对DGP的治疗作用可能通过促进组织RhoA、ROCK等蛋白表达, 增强 p-MLC的水平, 促进平滑肌收缩, 改善胃排空; (2)针刺能通过上调RhoA/ROCK信号的表达来改善DGP的症状, 各配伍组改变的差异证实按部选穴是影响腧穴配伍效应的重要因素, 且配伍局部穴明显优于配伍远端穴及非经非穴.

足三里为足阳明胃经之合穴, 胃下合穴, 凡胃脘疼痛, 不论其寒热虚实, 均可用之通调腑气; 中脘为任脉穴, 为胃之募穴, 八会穴之腑会, 且是任脉、手太阳、足阳明经交会穴, 两穴相配可调和胃气, 疏导中焦, 导滞止痛. 内关为手厥阴心包经之络穴, 沟通三焦, 功擅理气降逆, 又为八脉交会穴, 通于阴维脉, 足三里与内关相配能畅达三焦气机, 和胃降逆. 本课题组研究发现足三里+中脘穴组优于足三里+内关组和非经非穴组, 即配伍局部穴优于配伍远端穴及非经非穴.

局部选穴优于远端选穴的原因可能与局部穴位特异性相关. 局部选穴是指受病的脏腑, 五官、肢体部位选取腧穴, 旨在就近调整受病部位的气血阴阳, 是"腧穴所在, 主治所及"的具体体现[28]. 针灸治疗具有明确的针对性, 《针灸甲乙经》曰: "胃胀者, 中脘主之. "《针灸聚英》中治疗眩晕取风池、天柱; 《内经》中"以痛为腧", 也是针对病变部位的选穴原则. 电针局部取穴对佐剂关节炎大鼠痛觉过敏具有调整作用[29]. 采用局部取穴治疗颈型颈椎病和脊髓损伤后尿储留在临床上取得显著疗效[30,31], 患者症状得到明显改善. 研究[32]表明, 按病位取穴, 刺病之所在部位, 具有良好的靶点效应, 为局部选穴优于远部选穴的原因. 但本实验仅以DGP作为载体进行研究得出结论, 不同的疾病具有其不同症候特点, 按部选穴在治疗其他病种是否具有同种优势, 还有待进一步考证.

评论

背景资料

近年来针灸对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis, DGP)胃窦平滑肌影响的研究日益增多, 且不同的腧穴配伍具有疗效差异, 寻求最佳的腧穴配伍方式成为目前的一个研究重点. 本课题组通过采用不同的腧穴配伍治疗DGP大鼠发现, 针刺能调节DGP大鼠胃窦平滑肌的RhoA/ROCK信号表达, 且配伍局部穴疗效明显优于配伍远端穴及非经非穴.

同行评议者

杨宗保, 副教授, 厦门大学医学院中医系

研发前沿

腧穴配伍是在针灸选穴原则的指导下, 结合临床和腧穴主治特性, 选取两个以上作用相同的腧穴进行配伍以提高临床疗效, 不同的腧穴配伍具有疗效差异, 如何进行腧穴配伍, 提高临床疗效是本实验的研究目的.

相关报道

糖尿病胃肠动力障碍的机制目前尚不明确, 越来越多的研究认为胃肠平滑肌肌源性因素在该病的发生中起重要作用. 胃窦平滑肌组织中RhoA水平及蛋白表达的改变使得其下游的ROCK对肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase, MLCP)活性的抑制作用发生改变, 从而导致胃窦平滑肌收缩功能异常, 近年RhoA/ROCK信号表达在糖尿病并发症中的作用成为研究热点.

创新盘点

本文以DGP大鼠为研究对象, 固定循经选穴, 观察不同的按部选穴,治疗本病的疗效差异, 探讨按部选穴对DGP大鼠胃窦平滑肌RhoA/ROCK通路调节机制, 为按部选穴是腧穴配伍效应的影响因素提供科学依据.

应用要点

探讨腧穴配伍效应的影响因素; 探讨按部选穴针刺对DGP大鼠胃窦平滑肌RhoA/ROCK信号表达的调节机制; 探讨DGP与RhoA/ROCK信号表达的关系, 进一步阐明其发病机制.

名词解释

腧穴配伍: 基于中医理论, 在针灸选穴原则的指导下, 结合临床和腧穴主治特性, 选取两个以上作用相同的腧穴进行配伍, 发挥腧穴的协同增效作用, 以达到特定治疗效果, 提高临床疗效的一种方法;

按部选穴: 受病的脏腑, 五官、肢体部位选取腧穴, 旨在就近调整受病部位的气血阴阳, 是"腧穴所在, 主治所及"的具体体现.

同行评价

本文以DGP大鼠为研究对象, 观察不同的按部选穴针刺对DGP大鼠胃窦平滑肌RhoA/ROCK信号表达改变的差异, 探讨不同的腧穴配伍治疗本病的疗效差异, 证实按部选穴是腧穴配伍效应的影响因素, 具有一定研究价值.

备注

手稿来源: 自由投稿

学科分类: 胃肠病学和肝病学

手稿来源地: 湖南省

同行评议报告分类

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编辑:郭鹏 电编:闫晋利

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