临床经验 Open Access
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世界华人消化杂志. 2012-12-28; 20(36): 3773-3776
在线出版日期: 2012-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i36.3773
mir-21在食管鳞癌中的表达及其与临床病理行为的关系
赵俊刚, 任开明, 汤隽, 张磊
赵俊刚, 任开明, 汤隽, 张磊, 中国医科大学附属盛京医院胸外科 辽宁省沈阳市 110004
赵俊刚, 博士, 副教授, 主要从事胸外伤、肺部肿瘤、食管肿瘤、纵隔肿瘤的基础与临床研究.
基金项目: 辽宁省博士科研启动基金资助项目, No. 20091108.
作者贡献分布: 此课题由赵俊刚设计; 研究过程由赵俊刚与任开明操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由汤隽提供; 数据分析由赵俊刚、汤隽及张磊完成; 本论文写作由赵俊刚与张磊完成.
通讯作者: 赵俊刚, 副教授, 110004, 辽宁省沈阳市和平区三好街36号, 中国医科大学附属盛京医院胸外科. zhaoy3@si-hospital.org
电话: 024-66601267
收稿日期: 2012-11-14
修回日期: 2012-12-07
接受日期: 2012-12-20
在线出版日期: 2012-12-28

目的: 探讨原发性食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系.

方法: 应用Real-time RT-PCR法及2-∆∆CT分析法检测ESCC患者组织及相对应癌旁组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系.

结果: 96例ESCC标本中, 40例(41.6%)mir-21存在高表达, mir-21高表达与患者分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(均P<0.05).

结论: 在原发性ESCC中, mir-21有较高的表达率, 与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关, 可能在ESCC的发生发展中有重要作用.

关键词: 食管鳞癌; Real-time RT-PCR; MicroRNA-21
引文著录: 赵俊刚, 任开明, 汤隽, 张磊. mir-21在食管鳞癌中的表达及其与临床病理行为的关系. 世界华人消化杂志 2012; 20(36): 3773-3776
Relationship between mir-21 expression and clinical and pathological features of esophageal squamous cell carcinoma
Jun-Gang Zhao, Kai-Ming Ren, Jun Tang, Lei Zhang
Jun-Gang Zhao, Kai-Ming Ren, Jun Tang, Lei Zhang, Department of Thoracic Surgery, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, Liaoning Province, China
Supported by: the Doctor Startup Foundation for Docotors of Liaoning Province, No. 20091108.
Correspondence to: Jun-Gang Zhao, Associate Professor, Department of Thoracic Surgery, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, Liaoning Province, China. zhaoy3@si-hospital.org
Received: November 14, 2012
Revised: December 7, 2012
Accepted: December 20, 2012
Published online: December 28, 2012

AIM: To investigate mir-21 expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and to analyze its relationship with the clinical and pathological features of ESCC.

METHODS: Real-time RT-PCR and the 2-∆∆CT method were used to detect the expression of mir-21 in 96 cases of ESCC and tumor-adjacent tissue. The relationship between expression of mir-21 and clinical and pathological features of ESCC was analyzed.

RESULTS: Of 96 cases of ESCC specimens, mir-21 was highly expressed in 40 cases (41.6%). High mir-21 expression was closely related with the degree of tumor differentiation and TNM stage (both P < 0.05).

CONCLUSION: The high expression of mir-21 may play an important role in the occurrence and development of ESCC.

Key Words: Esophageal squamous cell carcinoma; Real-time RT-PCR; MicroRNA-21
0 引言

食管癌是世界范围内第6大导致死亡的恶性肿瘤, 在我国居第1位, 并且80%以上是食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC), 随着基础及临床研究的进展, ESCC的治疗有一定进步, 但术后生存率仍不容乐观[1,2]. MicroRNAs(miRNAs)是最近发现的一组天然丰富的小RNA, 长度为17-25个核苷酸[3]. 大量研究提示及证实miRNAs在恶性肿瘤的发生发展中扮演重要角色[4]. mir-21是miRNAs家族成员, 有研究表明mir-21与恶性肿瘤的发生发展关系密切[5,6], 但mir-21与ESCC的关系尚不明确. 本研究运用Real-time RT-PCR及2-∆∆Ct分析法, 检测96例ESCC组织及相对应癌旁组织中mir-21的表达变化, 探讨ESCC患者组织中mir-21的表达情况及其与ESCC临床病理行为的关系.

1 材料和方法
1.1 材料

收集2006-09/2011-09中国医科大学附属盛京医院胸外科食管癌手术切除标本96例. 癌旁组织取自距肿瘤边缘5 cm以上食管黏膜组织, 并且经病理诊断证实为癌旁正常食管组织. 其中男69例, 女27例, 年龄42-79岁(中位年龄63.2岁). 按照国际抗癌联盟(UICC)2009年标准, 高中分化71例, 低分化25例. 病变位于食管上中段27例, 下段69例. 伴有淋巴结转移53例, 无淋巴结转移43例. TNM分期Ⅰ/Ⅱ期45例, Ⅲ/Ⅳ期51例. 全部肿瘤标本术后病理诊断为鳞状细胞癌, 所有患者术前未接受放化疗. 上述组织切除后, 用液氮冷冻并放置于-80 ℃冰箱中备用. RNA提取试剂盒购自QiQgen公司; 反转录试剂盒购自Promega(美国)公司; RT-PCR试剂盒购自TakaRa(日本)公司, 引物由南京金斯瑞公司提供.

1.2 方法

总RNA提取和Real-time RT-PCR检测mir-21的表达: 总RNA采用TRIzol reagent提取, 按照说明书的操作方法进行常规操作; 然后使用RevertAidTM reverse transcriptase将这些RNA样品逆转录为cDNA. 然后进行PCR扩增, 反应条件: 50 ℃ 2 min, 95 ℃ 10 min, 95 ℃ 15 s, 50个循环, 60 ℃ 1 min. GAPDH作为内参, 上游引物: 5'-CAATGACCCCTTCATTGACC-3', 下游引物: 5'-TGGAAGATGGTGATGGGATT-3'; mir-21上游引物: 5'-TGACCACAGTCCATGCCATC-3', 下游引物: 5'-CCACCCTGTTGCTGTAGCC-3'.

统计学处理 GAPDH mRNA作为内参来监控, 通过2-∆∆Ct法计算ESCC与癌旁组织胞之间目标miRNA表达水平的差异, mir-21的mRNA水平表示为2-∆∆Ct, 其中∆Ct = Ct(mir-21)-Ct(GAPDH), ∆∆Ct = ∆Ct(肿瘤组织)-∆Ct(正常组织). 采用SPSS11.5统计学软件, 使用Student's t-test进行数据统计. 以P<0.05判定有显著统计学意义.

2 结果
2.1 mir-21在ESCC组织中的表达

我们通过Real- time RT-PCR方法检测了96例ESCC标本组织及相对应癌旁组织中mir-21的表达情况, 在96例ESCC标本中有40例(41.6%)出现了相对于癌旁组织的mir-21高表达(∆∆Ct<-1). 14例(14.6%)出现了低表达(∆∆Ct>1), 42例(43.7%)表达无明显差异(-1<∆∆Ct<1); mir-21在ESCC及相对应癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05, 图1).

图1
图1 mir-21在食管鳞癌组织和相对应癌旁组织中的表达水平.
2.2 mir-21的表达与ESCC临床病理行为的关系

经统计学分析发现, mir-21的高表达与患者分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关, 有淋巴结转移的ESCC标本中mir-21的表达明显高于无淋巴结转移组(χ2 = 5.913, P<0.05), 低分化组ESCC标本中mir-21的表达明显高于高分化组(χ2 = 5.647, P<0.05), 与患者的年龄、性别和肿瘤的位置无关(表1).

表1 食管鳞癌患者组织中mir-21的表达与食管鳞癌临床病理行为的关系.
临床资料nmean±SDP值
年龄(岁)>0.05
≥60630.9927±0.1312
＜60330.7275±0.2039
性别>0.05
男690.9735±0.1513
女270.8279±0.1987
分化程度0.039
低251.5031±0.5832
中、高710.7402±0.0401
肿瘤位置>0.05
食管上中段271.2135±0.4423
下段691.0321±0.2578
淋巴转移0.026
N0430.8313±0.0399
N1/N2531.6234±0.7232
TNM分期0.017
Ⅰ/Ⅱ451.3372±0.4989
Ⅲ/Ⅳ511.5343±0.5129
3 讨论

许多miRNA可作为原癌基因或抑癌基因, 在肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色[7,8], 其中mir-21最受人重视[9,10], 大量实验证明在多种肿瘤细胞中mir-21的表达均出现显著异常, 揭示mir-21作为一个致癌的miRNA[11], 在多种肿瘤的发生发展中起重要作用, mir-21可以抑制细胞凋亡而促进肿瘤增殖[12,13].

Wong等[14]发现, 在原发性胶质母细胞瘤组织中mir-21表达上调, 证明mir-21不仅影响神经胶质瘤的形成, 还能抑制神经胶质瘤对化疗药物的敏感性. Kurashige等[15]发现ESCC患者血清中mir-21表达下调, 化疗敏感者mir-21的水平明显下降, 提示血清mir-21的表达水平可能成为潜在的ESCC诊断生物标志物, 也可能作为化疗的反应标志物.

本研究采用Real-time RT-PCR法检测了96例ESCC患者组织中及相对应癌旁组织中mir-21的表达, 并用2-∆∆Ct分析法分析96例ESCC患者组织及癌旁组织中mir-21的表达差异情况. 结果显示, 相对于癌旁组织, 96例ESCC标本中有40例(41.6%)出现mir-21的高表达, mir-21在ESCC及相对应癌旁组织中的表达差异有统计学意义. 研究结果表明, 在原发性ESCC中, mir-21有较高的表达率, 与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关, mir-21基因在ESCC发生发展中可能扮演着癌基因的角色.

mir-21与ESCC的关系的研究尚处于初步阶段, 对其深入研究有助于ESCC发生发展机制的探索, 将可能为ESCC的早期诊断、临床诊疗、提高化疗敏感性、提供更多理论依据[16-18].

评论
背景资料

miRNAs在恶性肿瘤的发生发展中扮演重要角色. mir-21是miRNAs家族成员, 有研究表明mir-21与恶性肿瘤的发生发展关系密切, 但mir-21与ESCC的关系尚不明确.

同行评议者

姜春萌, 教授, 主任, 大连医科大学附属第二医院消化科; 郭炜, 教授, 河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所病理研究室; 李瑗, 教授,广西肿瘤研究所实验研究部

研发前沿

本研究运用Real- time RT-PCR及2-∆∆Ct分析法, 检测96例ESCC组织及相对应癌旁组织中mir-21的表达变化, 探讨原发性ESCC患者组织中mir-21的表达情况及其与ESCC临床病理行为的关系.

相关报道

Wong等发现, 在原发性胶质母细胞瘤组织中mir-21表达上调, 证明mir-21不仅影响神经胶质瘤的形成, 还能抑制神经胶质瘤对化疗药物的敏感性.

创新盘点

探讨原发性ESCC患者组织中mir-21的表达情况及其与ESCC临床病理行为的关系.

应用要点

mir-21与ESCC的关系的研究尚处于初级阶段, 对其深入研究有助于ESCC发生发展机制的探索, 将可能为ESCC的早期诊断、临床诊疗、提高化疗敏感性、提供更多理论依据.

同行评价

本文探讨食管鳞癌组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系, 文章有一定的新颖性、科学性和可读性.

编辑:李军亮 电编:鲁亚静

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