研究快报 Open Access
Copyright ©The Author(s) 2012. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2012-01-08; 20(1): 53-59
在线出版日期: 2012-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i1.53
艾灸预处理对大鼠应激性胃黏膜损伤增殖修复相关因子的影响
刘密, 常小荣, 严洁, 岳增辉, 张泓, 彭艳
刘密, 常小荣, 湖南中医药大学针灸推拿学院 湖南省长沙市 410007
严洁, 张泓, 国家中医药管理局经穴-脏腑相关重点研究室 湖南省长沙市 410007
岳增辉, 彭艳, 湖南省教育厅针灸生物信息分析重点实验室 湖南省长沙市 410007
基金项目: 国家重点基础研究发展计划基金资助项目, No. 2009CB 522904; 国家自然科学基金资助项目, No. 81173326; 湖南省高校创新平台开放基金资助项目, No. 11K047; 湖南省研究生科研创新基金资助项目, No. CX2009B172; 湖南省针灸推拿学重点学科基金资助项目.
作者贡献分布: 常小荣与刘密对此文作主要贡献; 此课题由常小荣与严洁设计; 研究过程由刘密、岳增辉、张泓及彭艳操作完成; 数据分析由刘密与彭艳完成; 论文写作由刘密与常小荣完成.
通讯作者: 常小荣, 教授, 博士生导师, 410007, 湖南省长沙市韶山中路113号, 湖南中医药大学针灸推拿学院. xrchang1956@163.com
电话: 0731-88458187
收稿日期: 2011-10-14
修回日期: 2011-11-27
接受日期: 2011-12-23
在线出版日期: 2012-01-08

目的: 观察艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠血清和胃黏膜表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-a(TGF-a)、胃黏膜三叶因子家族-1(TFF1)、增殖细胞核抗原(PCNA)的影响, 探讨艾灸预处理促进胃黏膜损伤增殖修复的作用机制.

方法: 将48只健康SD大鼠随机分为4组, 即空白组、模型组、艾灸穴位组、艾灸非穴组. 束缚冷应激法制作大鼠应激性胃黏膜损伤模型. 造模之前, 艾灸组选取足三里、中脘、脾俞和胃俞等穴位行艾灸预处理8 d, 艾灸非穴组选取非穴对照点进行预处理. 以Guth法计算胃黏膜损伤指数, 光镜下观察大鼠胃黏膜组织学改变, 放射免疫法测定血清EGF与TGF-a的含量, 酶免法检测胃黏膜组织中EGF、TGF-a、TFF1和PCNA的含量.

结果: 与模型组和艾灸非穴组比较, 艾灸足三里、中脘等穴位可使应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜损伤指数明显下降(14.667±5.710 vs 27.250 ± 7.448, 24.750 ± 7.300, P<0.01), 血清EGF、TGF-a含量升高(2.167±0.756 vs 1.147±0.983, 1.358±0.962, P<0.05; 11.170±1.315 vs 4.585±0.720 vs 5.118±0.659, P<0.01), 胃黏膜EGF、TGF-a和PCNA含量升高(343.560±27.644 vs 269.610±45.119, 279.590±58.890, P<0.05; 147.470±17.784 vs 115.530±24.319, 116.620±14.908, P<0.01; 191.910±37.262 vs 154.580±18.910, 152.450±20.333, P<0.05); 与模型组比较, 艾灸穴位组胃黏膜TFF1含量明显升高(4.573±0.121 vs 3.654±0.507, P<0.05).

结论: 艾灸足三里、中脘等穴位预处理可减轻束缚水浸应激所造成大鼠胃黏膜损伤、促进胃黏膜损伤组织增殖修复, 可能是通过上调胃黏膜损伤增殖修复相关因子(EGF、TGF-a、TFF1和PCNA)而达到其促胃黏膜损伤修复的作用.

关键词: 艾灸预处理; 胃黏膜损伤; 增殖; 生长因子; 三叶因子; 增殖细胞核抗原
引文著录: 刘密, 常小荣, 严洁, 岳增辉, 张泓, 彭艳. 艾灸预处理对大鼠应激性胃黏膜损伤增殖修复相关因子的影响. 世界华人消化杂志 2012; 20(1): 53-59
Effect of moxibustion preconditioning on proliferation and repair factors in gastric mucosa of rats with stress-induced gastric mucosal lesions
Mi Liu, Xiao-Rong Chang, Jie Yan, Zeng-Hui Yue, Hong Zhang, Yan Peng
Mi Liu, Xiao-Rong Chang, College of Acu-Moxibustion and Tuina, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410007, Hunan Province, China
Jie Yan, Hong Zhang, Key Laboratory of Correlativity between Meridian Point and Viscera, State Administration of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410007, Hunan Province, China
Zeng-Hui Yue, Yan Peng, Key Laboratory of Biological Information Analysis for Acupuncture and Moxibustion, Department of Education of Hunan Province, Changsha 410007, Hunan Province, China
Supported by: the National Key Basic Research and Development Program, No.2009CB522904; National Natural Science Foundation of China, No.81173326; the Open Foundation for Hunan Provincial University Innovation Platform, No.11K047; the Postgraduate Research and Innovation Project of Hunan Province, No.CX2009B172
Correspondence to: Xiao-Rong Chang, Professor, College of Acu-Moxibustion and Tuina, Hunan University of Chinese Medicine, 113 Shaoshan Middle Road, Changsha 410007, Hunan Province, China. xrchang1956@163.com
Received: October 14, 2011
Revised: November 27, 2011
Accepted: December 23, 2011
Published online: January 8, 2012

AIM: To observe the effect of moxibustion preconditioning on proliferation and repair factors (EGF, TGF-a, TFF1 and PCNA) in the serum and gastric mucosa of rats with stress-induced gastric mucosal lesions, and to explore the possible mechanisms involved.

METHODS: Forty eight SPF-class SD rats were randomly divided into blank group, model group, acupoint moxibustion (AM) group and non-acupoint moxibustion (N-AM) group. After 8 days of pretreatment, the rats except those in the blank group received water restraint stress (WRS) to induce gastric mucosal lesions. The gastric mucosal injury index was evaluated using the Guth's method. Histological changes in the gastric mucosa were observed by light microscopy. Serum contents of EGF and TGF-a were measured by radioimmunoassay and the contents of EGF, TGF-a , TFF1 and PCNA in the gastric mucosa were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

RESULTS: Compared to the model group and N-AM group, gastric mucosal injury index decreased markedly (14.667 ± 5.710 vs 27.250 ± 7.448, 24.750 ± 7.300, both P < 0.01) while the contents of EGF and TGF-a in the serum (2.167 ± 0.756 vs 1.147 ± 0.983, 1.358 ± 0.962, both P < 0.05; 11.170 ± 1.315 vs 4.585 ± 0.720 vs 5.118 ± 0.659, both P < 0.01) and those of EGF, TGF-a and PCNA in the gastric mucosa (343.560 ± 27.644 vs 269.610 ± 45.119, 279.590 ± 58.890, both P < 0.05; 147.470 ± 17.784 vs 115.530 ± 24.319, 116.620 ± 14.908, both P < 0.01; 191.910 ± 37.262 vs 154.580 ± 18.910, 152.450 ± 20.333, both P < 0.05) increased significantly in the AM group. Compared to model group, the content of TFF1 in the gastric mucosa increased significantly (4.573 ± 0.121 vs 3.654 ± 0.507, P < 0.05) in the AM group.

CONCLUSION: Moxibustion preconditioning at acupoints can repair stress-inducd gastric mucosal injury and promote gastric mucosa cell proliferation via mechanisms which are closely related to elevating the contents of factors for proliferation and repair (EGF, TGF-a, TFF1 and PCNA) in the serum and gastric mucosa.

Key Words: Moxibustion preconditioning; Gastric mucosal lesion; Proliferation; Growth factor; Trefoil factor family; Proliferating cell nuclear antigen
0 引言

胃黏膜损伤主要是通过损伤后的早期重建(上皮移行)以及细胞增生进行修复[1,2], 而细胞增殖是胃黏膜深度损伤与慢性损伤的基本修复方式. 目前已证实有多种生长因子和细胞因子参与胃黏膜上皮损伤修复的调节, 表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、转化生长因子-a(transforming growth factor-a, TGF-a)具有促胃黏膜上皮细胞迁移和增殖的作用[3]; 三叶因子(trefoil factor family, TFF)能与EGF、TGF-a协同作用, 参与损伤组织的上皮重建过程[4]; 增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是反映细胞增殖状态的直接量度指标[5]. 临床实践证实[6,7], 运用艾灸疗法对胃黏膜损伤相关的疾病(如胃溃疡、急慢性胃炎)具有很好的防治作用, 不仅可以改善临床症状, 还具有抗损伤作用, 可以促进溃疡修复和愈合. 艾灸作为一种生理性温热刺激源, 其对胃黏膜的保护机制可能是其激发机体产生内源性保护物质如热休克蛋白(heat shock proteins, HSP)的同时, 又启动了一系列抗炎、抗氧化、抑制凋亡等抗胃黏膜损伤效应以及损伤后胃黏膜细胞增殖、重建等保护效应[8,9]. 前期研究发现[10], 艾灸预处理可以增加胃黏膜血流量, 促进TGF-a合成、HSP70 mRNA和PCNA的表达, 降低胃黏膜细胞凋亡指数, 从而促进损伤黏膜周围的细胞增殖, 抑制细胞凋亡等. 本实验在前述研究的基础上继续探讨艾灸预处理对大鼠胃黏膜损伤细胞增殖的修复作用及其相关因子表达的影响.

1 材料和方法
1.1 材料

健康SPF级SD大鼠48只, 雌雄各半, 体质量200-250 g, 月龄3-4 mo, 购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司. 将大鼠随机分为4组: 空白组, 模型组, 艾灸穴位组, 艾灸非穴组, 每组12只. 饲养于湖南中医药大学实验动物中心SPF级实验动物房, 饲养温度22 ℃-25 ℃, 湿度40%-60%, 自然采光.

温灸纯艾条(南阳卧龙汉医艾绒厂); 20%乌拉坦、0.9% NaCl(湖南中医药大学针灸生物信息分析实验室配制); h-EGF、大鼠TGF-a放免试剂盒(北京华英生物技术研究所); 大鼠EGF、TGF-a、TFF1、PCNA酶免(ELISA)试剂盒(长沙维尔生物科技有限公司); g-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司); PW-960多功能全自动酶标洗板机, MB酶标仪(深圳汇松科技有限公司); OLYMPUS Bx-70显微镜成像系统(日本OLYMPUS公司).

1.2 方法

1.2.1 分组与艾灸: 空白组(A组): 仅做与C组相同的固定; 模型组(B组): 不做任何干预, 只做与C组相同的固定; 艾灸穴位组(C组): 捆缚固定于鼠板上施灸, 2组穴位: (1)足三里、中脘; (2)脾俞、胃俞. 每天取1组穴位施灸30 min, 2组交替进行. 动物穴位定位法及拟人对照法定位参考文献[11]. 足三里位于膝关节后外侧, 在腓骨小头下约5 mm处; 中脘位于脐上约20 mm(以胸锁联合和耻骨联合连线下1/4与上3/4交点为肚脐); 脾俞位于第12胸椎下旁开5 mm; 胃俞位于第13胸椎下旁开5 mm. 将艾条固定在自制简易灸架上, 对准施灸部位(覆盖、固定隔热薄膜, 中央小孔直径为3 mm), 距离约2 cm处点燃施灸. 每天每穴连续灸30 min, 连续8 d. 艾灸非穴组(D组): 捆缚固定于鼠板上施灸, 2组非穴对照点: (1)足三里对照点、中脘对照点; (2)脾俞对照点、胃俞对照点. 每天取1组施灸, 2组交替进行. 足三里对照点位于膝关节内侧与足三里平行的非穴位点, 距离胫骨内侧5 mm的非穴点; 中脘对照点位于中脘穴右外侧旁开1 cm的非穴点; 脾俞对照点位于脾俞穴外侧旁开1 cm的非穴点; 胃俞对照点位于胃俞穴外侧旁开1 cm的非穴点. 施灸方法同C组.

1.2.2 造模: 采用束缚冷应激法制作大鼠应激性胃黏膜损伤模型[12]. B、C、D组大鼠于第8天处理后禁食不禁水24 h后, 束缚于鼠板上, 置于20 ℃水中, 水面平胸骨剑突水平, 10 h后取出松绑.

1.2.3 指标检测: 所有动物用20%乌拉坦以10 mL/kg腹腔注射麻醉. 剖腹后, 将胃的幽门部和贲门部用止血钳结扎, 快速用一次性负压采血针从腹主动脉采血5 mL置于37 ℃恒温水浴箱30 min, 4 ℃低温离心, 3 000 r/min, 离心15 min, 离心后提取上清液置于-20 ℃冰箱保存, 放射免疫法测定血清EGF、TGF-a. 在两结扎线的两端切断食道及十二指肠, 摘下全胃, 沿胃大弯剖开, 用冰生理盐水冲洗, 平展于滤纸上按Guth法[13]计算胃黏膜损伤指数. 每组随机抽取6只取胃窦部组织, 分析天平称重, 按1.5 L/400 g加入生理盐水, 用玻璃匀浆器研磨肆40-50次, 制成胃黏膜组织匀装, 离心(3 000 r/m, 4 ℃, 10 min), 取上清液, -20 ℃低温保存, 酶免法检测胃黏膜组织匀浆中EGF、TGF-a、TFF1和PCNA的含量. 剩余6只取胃窦部组织1小块(约5 mm×10 mm)放入40 g/L多聚甲醛中固定24 h, 石蜡包埋, 间断连续切片(厚度4 µm)、烤片、常规脱蜡; 光镜下观察组织学改变.

统计学处理 所有测量数据用mean±SD表示; 所有资料进行正态性检验. 符合正态分布者, 多组计量资料采用单因素方差分析(One-way ANOVA); 方差齐者用LSD和SNK法, 方差不齐者用Tamhane's T2或Dunnett's T3法; 不符合正态分布者采用秩和检验. 所有数据使用SPSS16.0 for Windows软件进行处理.

2 结果
2.1 胃黏膜损伤指数

A组大鼠经捆绑束缚及禁食处理后, 胃黏膜偶有轻度损伤(10.250±4.575); 与A组比较, B组胃黏膜损伤指数显著高于A组(27.250±7.448 vs 10.250±4.575, P<0.01), 说明造模成功; 与B组相比, C组胃黏膜损伤指数显著低于B组(14.667±5.710 vs 27.250±7.448, P<0.01), D组比B组略有下降(24.750±7.300 vs 27.250±7.448, P>0.05); C组与D组相比较, C组胃黏膜损伤指数明显降低(14.667±5.710 vs 24.750±7.300, P<0.01), 说明艾灸可降低胃黏膜损伤程度, 且艾灸穴位作用优于非穴位.

2.2 胃黏膜光镜观察

光镜下, A组可见胃底黏膜层的上皮、固有层和部分黏膜肌层, 胃黏膜表面细胞完整, 无明显损害; 与A组比较, B组大鼠胃黏膜出现明显破损、脱落, 胃黏膜损伤明显; 与B组比较, C组大鼠胃黏膜表面有部分脱落, 破损情况明显改善, 胃黏膜表面细胞较完整; 与C组比较, D组大鼠胃黏膜表面破损较严重, 部分脱落(图1).

图1
图1 各组大鼠胃黏膜光镜观察结果. A: A组; B: B组; C: C组; D: D组.
2.3 艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠EGF、TGF-a的影响

血清: (1)与A组相比, B组大鼠血清EGF、TGF-a含量明显降低(P<0.05, P<0.01), 表明束缚水浸应激造模后可使血清EGF、TGF-a含量降低; (2)与B组相比, C组大鼠血清EGF、TGF-a含量明显升高(P<0.05, P<0.01), 说明艾灸足三里、中脘等穴可提高胃黏膜损伤大鼠血清中EGF、TGF-a的含量; (3)C组大鼠血清EGF、TGF-a含量明显高于D组(P<0.05, P<0.01), 表明艾灸预处理升高胃黏膜损伤大鼠血清中EGF、TGF-a含量的作用具有腧穴的特异性.

胃黏膜: (1)与A组相比, B组大鼠胃黏膜损伤周围组织EGF、TGF-a含量有升高的趋势, 其中TGF-a的含量明显增加(P<0.05), 表明束缚水浸应激后, 胃黏膜损伤周围组织EGF、TGF-a表达增强; (2)与B组相比, C组大鼠胃黏膜EGF、TGF-a含量明显升高(P<0.05, P<0.01), 说明艾灸足三里、中脘等穴可提高胃黏膜损伤大鼠胃黏膜EGF、TGF-a的含量; (3)C组大鼠胃黏膜EGF、TGF-a含量明显高于D组(P<0.05, P<0.01), 表明艾灸预处理增强胃黏膜损伤大鼠胃黏膜EGF、TGF-a表达水平的作用具有腧穴的特异性(表1).

表1 各组大鼠血清和胃黏膜EGF、TGF-α含量的比较 (mean±SD, ng/L).
分组 血清(n = 12)
 胃黏膜 (n = 6)
EGFTGF-αEGFTGF-α
A组2.115±1.0369.369±0.840227.320±64.99590.725±12.322
B组1.147±0.983a4.585±0.720b269.610±45.119115.530±24.319a
C组2.167±0.756c11.170±1.315bd343.560±27.644bc147.470±17.784bd
D组1.358±0.962e5.118±0.659bf279.590±58.890e116.620±14.908af
aP<0.05,
bP<0.01 vs A组;
cP<0.05,
dP<0.01 vs B组;
eP<0.05,
fP<0.01 vs C组.
2.4 艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠TFF1、PCNA的影响

(1)与A组相比, B组大鼠胃溃疡周围黏膜TFF1、PCNA含量有升高的趋势, 而C组大鼠胃黏膜TFF1、PCNA含量明显升高(P<0.05, P<0.01), 表明束缚水浸应激后, 胃黏膜损伤周围组织TFF1、PCNA表达增强; (2)与B组相比, C组大鼠胃黏膜TFF1、PCNA含量明显升高(P<0.05), 说明艾灸足三里、中脘等穴可促进胃黏膜损伤大鼠胃黏膜TFF1、PCNA的表达; (3)C组大鼠胃黏膜PCNA含量明显高于D组(P<0.05), 表明艾灸预处理增强胃黏膜损伤大鼠胃黏膜PCNA表达水平的作用具有腧穴的特异性(表2).

表2 各组大鼠胃黏膜TFF1、PCNA含量的比较(mean±SD, n = 6).
分组TFF1(μg/L)PCNA(ng/L)
A组3.558±0.591133.510±15.435
B组3.654±0.507154.580±18.910
C组4.573±0.121ac191.910±37.262bc
D组3.836±0.963152.450±20.333e
aP<0.05,
bP<0.01 vs A组;
cP<0.05 vs B组;
eP<0.05 vs C组.
3 讨论

适应性细胞保护是一种细胞增殖的过程, 通过细胞的有丝分裂来补偿已损伤或坏死的黏膜细胞, 这是胃黏膜损伤后的重要修复功能. 适应性细胞保护时细胞增殖起始于胃腺小凹的底部和颈部的增殖区, 其修复过程包括炎症反应、细胞分裂和分化以及新生的细胞迁移到损伤病灶的周围, 使损伤的黏膜组织恢复正常的形态和功能[14,15]. 有多种生长因子和细胞因子参与了胃黏膜损伤后细胞增殖修复的调节, 如EGF、TGF-a、TFF等. 艾灸的温热刺激作用于穴位, 激发经气, 在灸法"治未病"和预防胃溃疡复发方面独具优势, 艾灸能够诱导机体产生内源性保护物质, 作为免疫源激活免疫系统而治疗胃肠道疾病[16,17]. 杨宗保等[18]报道, 艾灸足阳明胃经足三里、梁门穴对大鼠急性胃黏膜损伤胃黏膜组织形态学具有很好的改善作用. 本课题组研究发现[10,19], 艾灸通过增加胃黏膜血流量, 促进TGF-a合成、增强HSP 70与PCNA的表达, 对抗应激性损伤, 促进损伤黏膜周围的细胞增殖. 本实验进一步从胃黏膜损伤增殖修复相关因子(EGF、TGF-a、TFF1和PCNA)的角度研究艾灸预处理对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用.

EGF是一类内源性保护物质, 具有抑制胃酸分泌, 促进上皮增殖、组织修复和细胞保护的作用, 在保护胃黏膜免受损伤因子破坏, 维持胃肠黏膜完整性方面起着非常重要的作用[20]. TGF-a是EGF家族中另一类参与胃黏膜损伤后修复的主要调节肽, 参与调解胃肠道黏膜上皮的更新和损伤后的修复, 是维持黏膜完整性的重要介质, 被称为"黏膜完整肽", 可促进细胞增殖, 抑制胃液分泌和增加溃疡边缘的血流量[21]. EGF、TGF-a可作为自分泌或旁分泌生长因子诱导其受体EGFR磷酸化, 提供持续分裂信号到细胞内, 引起细胞增殖、分化[22]. 在胃肠道黏膜出现损伤时, 体液中的EGF、TGF-a含量往往低下[23], 治疗后其含量又会显著增高[24,25]; 尤其是黏膜损伤部位, 其浓度会更高, 损伤后可迅速引起TGF-a的反应性表达, 且在损伤愈合过程中, TGF-a在黏膜的表达呈逐步升高的趋势[26]; 说明EGF、TGF-a刺激了损伤部位细胞的代谢, 加速了胃肠道上皮的修复. 本次实验同样观察到: 束缚水浸应激造模后, 胃黏膜组织病理形态改变的同时, 血清EGF、TGF-a含量明显降低, 而胃黏膜损伤周围组织EGF、TGF-a含量有升高的趋势, 艾灸足三里、中脘等穴可提高胃黏膜损伤大鼠血清与胃黏膜中EGF、TGF-a的含量, 提示艾灸促进胃黏膜损伤的修复作用可能是通过上调EGF、TGF-a的表达而启动的.

TFF是近年来研究较多的一群小分子多肽, 又称三叶肽. TFF在胃肠道黏膜屏障和修复中发挥着重要的生理功能, 通过与黏蛋白结合对胃肠道起保护作用, 并涉及黏膜重建的不同步骤, 特别是调节细胞-细胞连接、细胞移行[27,28]. TFF是一种运动因子, 能与EGF及TGF-a协同作用, 参与损伤组织的上皮重建过程, 即促进受损黏膜周围完好的上皮细胞向损伤黏膜表面迁移覆盖, 促进损伤黏膜的修复[29]. 有研究表明[4], TFF1在人消化性溃疡及药物诱导的兔胃溃疡中的表达较正常升高, 提示其在胃黏膜保护及上皮重建机制中具有重要的作用. 本次研究结果也表明: 在束缚水浸应激后, 胃黏膜损伤周围组织TFF1表达增强, 艾灸预处理后大鼠胃黏膜TFF1含量明显升高, 说明艾灸足三里、中脘等穴可促进胃黏膜损伤大鼠胃黏膜TFF1的表达, 为胃黏膜上皮迁移修复提供条件.

PCNA是一种细胞周期调节蛋白, 其合成水平反映了细胞增殖率及DNA合成率[30]. 胃黏膜PCNA表达变化反映了胃黏膜损伤和修复过程中胃黏膜细胞的增殖活性. 有研究表明[31], 在应激性损伤恢复的早期阶段启动细胞增殖, 提示受损胃黏膜结构和功能的恢复依赖于黏膜细胞的增殖, 即机体通过细胞增殖以补偿因应激因素导致的胃上皮细胞缺失. 这与本次实验结果基本一致: 束缚水浸应激后, 胃黏膜损伤周围组织PCNA的含量呈上升的趋势, 说明造模后胃溃疡周围黏膜细胞增殖活动加强; 在艾灸预处理后大鼠胃黏膜PCNA含量明显升高, 说明艾灸足三里、中脘等穴可增强胃黏膜损伤后的细胞增殖能力.

艾灸预处理作为中医治未病的重要手段, 是指在机体未病或疾病尚未发生之前, 预先运用艾灸对某些腧穴进行温热刺激, 激发经络之气, 增强机体的抗病与应变能力, 从而防止疾病的发生, 减轻疾病对机体的损害[32]. 扶助正气是灸法治未病的根本, 而腧穴的选择是灸治未病的关键所在; 腧穴是灸法作用的内因, 艾灸产生的药性和热量则是灸法作用的外因, 只有内因与外因二者有机地结合, 才能产生"艾灸-穴位-经络"的"综合效应", 发挥灸法防治疾病的作用[33,34]. 胃黏膜损伤性疾病如消化性溃疡、各型急慢性胃炎, 根据其临床表现, 可归属于中医"胃脘痛"范畴, 《针灸精粹》中提到足三里、中脘二穴: "理胃病, 兼治腹中一切疾病". 足三里是足阳明胃经的合穴、胃的下合穴, 《灵枢•邪气脏腑病形》提出"合治内府", 因此足三里是主治胃病的首选穴, 也是灸法防病保健、扶助正气的必用穴位; 中脘是胃的募穴, 募穴也善治腑病, 足三里(合穴)与中脘(募穴)配伍, "合募配穴"擅长治疗胃病; 脾俞、胃俞分别为脾、胃的背俞穴, 俞穴偏于治疗寒证、虚证, 如因脾胃虚寒导致的胃脘痛, 多采用艾灸脾俞、胃俞治疗; 胃俞(背俞穴)与中脘(募穴)合用则称为"俞募配穴", 对于虚实并见、寒热错杂的脏腑病证疗效显著, 如虚寒性胃痛, 其本为虚寒, 其标为痛, 属本虚标实之证, 可取胃俞、中脘灸之, 和胃气而定痛.

本研究采用艾灸足三里、中脘、脾俞、胃俞等穴位预处理, 发现其可以明显减轻因束缚水浸而造成的应激性胃黏膜损伤, 并上调EGF、TGF-a、TFF1和PCNA的表达水平, 提示艾灸穴位预处理对胃黏膜损伤后增殖修复相关因子有较好的调控作用: 艾灸足三里、中脘等穴所诱发的经气可刺激机体合成和分泌内源性保护因子(EGF、TGF-a), 启动黏膜修复机制, 诱导TFF1与EGF、TGF-a协同作用, 加强胃黏膜细胞增殖能力, 且艾灸穴位的综合效应优于艾灸非穴对照点, 表明艾灸足三里、中脘等穴促进胃黏膜损伤修复具有一定的腧穴特异性.

评论
背景资料

艾灸作为一种生理性温热刺激源, 在灸法"治未病"和预防溃疡复发方面独具优势, 能够激发机体产生内源性保护物质, 作为免疫源激活免疫系统而治疗胃肠道疾病.

同行评议者

管冬元, 副教授, 上海中医药大学基础医学院实验中医学教研室

研发前沿

近来研究表明, 多种生长因子和细胞因子参与了胃黏膜损伤后细胞增殖修复的调节, 如表皮生长因子家族(EGF、TGF-α)、三叶因子家族(trefoil factor family, TFF)等.

相关报道

陈菁菁等研究艾灸足三里预防胃溃疡的可能机制, 发现艾灸预处理可能是通过刺激胃黏膜中EGF及EGFR的表达, 进而减轻胃黏膜损伤程度, 促进溃疡愈合.

创新盘点

本研究观察了艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤的保护作用, 并分析了这一作用与增殖修复相关因子的关系.

应用要点

运用艾灸疗法防治胃黏膜损伤性疾病如消化性溃疡、各型急慢性胃炎, 扶助正气、促进修复, 腧穴的选择是其关键所在.

同行评价

本文从中医"治未病"的角度, 研究艾灸预处理促进胃黏膜损伤的增殖修复作用, 阐明了其部分机制, 对临床具有一定的指导意义.

编辑:张姗姗 电编:何基才

1.  Podolsky DK. Mucosal immunity and inflammation. V. Innate mechanisms of mucosal defense and repair: the best offense is a good defense. Am J Physiol. 1999;277:G495-G499.  [PubMed]  [DOI]
2.  Wright NA. Aspects of the biology of regeneration and repair in the human gastrointestinal tract. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 1998;353:925-933.  [PubMed]  [DOI]
3.  姒 健敏. 关注生长因子对胃黏膜的保护作用. 中华医学杂志. 2005;85:2744-2745.  [PubMed]  [DOI]
4.  任 建林, 卢 雅丕, 王 琳, 陈 建民, 施 华秀, 叶 震世, 吴 艳环, 钟 燕, 林 逊汀, 林 辉. TFF1在正常及损伤胃黏膜中的表达改变. 世界华人消化杂志. 2003;11:1809-1810.  [PubMed]  [DOI]
5.  向 生光, 胡 维新. 增殖细胞核抗原PCNA在DNA修复中的作用. 生命的化学. 2009;29:472-476.  [PubMed]  [DOI]
6.  Nie B, Luo RH, Chen XL, Xu K. Clinical research of moxibustion therapy on gastralgia due to deficiency and cold. J Acupunct Tuina Sci. 2011;9:98-100.  [PubMed]  [DOI]
7.  洪 金标, 易 受乡, 黄 芸, 林 亚平, 杜 燕, 彭 宏, 彭 艳. 艾灸血浆对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的影响. 世界华人消化杂志. 2010;18:3287-3293.  [PubMed]  [DOI]
8.  Liu M, Chang XR, Yan J, Yi SX, Lin YP, Yue ZH, Peng Y. Effects of Moxibustion Pretreatment on GSH-Px, SOD and MDA in Gastric Mucosa of Rats with Stress Ulcer. J Acupunct Tuina Sci. 2011;9:17-20.  [PubMed]  [DOI]
9.  Yi SX, Peng Y, Chang XR, Peng N, Yan J, Lin YP. Effect of pre-moxibustion on apoptosis and proliferation of gastric mucosa cells. World J Gastroenterol. 2007;13:2174-2178.  [PubMed]  [DOI]
10.  易 受乡, 彭 艳, 常 小荣, 彭 娜, 严 洁, 林 亚平. 艾灸对应激性胃溃疡大鼠胃粘膜细胞增殖和凋亡的影响及其与热休克蛋白表达关系的研究. 针刺研究. 2006;31:259-271.  [PubMed]  [DOI]
11.  李 忠仁, 方 剑乔, 易 受乡, 郭 义. 实验针灸学. 第1版. 北京: 中国中医药出版社 2003; 314-329.  [PubMed]  [DOI]
12.  Rokutan K. Role of heat shock proteins in gastric mucosal protection. J Gastroenterol Hepatol. 2000;15 Suppl:D12-D19.  [PubMed]  [DOI]
13.  Guth PH, Aures D, Paulsen G. Topical aspirin plus HCl gastric lesions in the rat. Cytoprotective effect of prostaglandin, cimetidine, and probanthine. Gastroenterology. 1979;76:88-93.  [PubMed]  [DOI]
14.  Takeuchi K, Kato S, Amagase K. Prostaglandin EP receptors involved in modulating gastrointestinal mucosal integrity. J Pharmacol Sci. 2010;114:248-261.  [PubMed]  [DOI]
15.  Mise S, Tonkic A, Pesutic V, Tonkic M, Mise S, Capkun V, Batelja L, Blagaic AB, Kokic N, Zoricic I. The presentation and organization of adaptive cytoprotection in the rat stomach, duodenum, and colon. Dedicated to André Robert the founder of the concept of cytoprotection and adaptive cytoprotection. Med Sci Monit. 2006;12:BR146-BR153.  [PubMed]  [DOI]
16.  刘 密, 彭 艳, 常 小荣, 严 洁, 易 受乡, 林 亚平, 岳 增辉. 艾灸温热效应的生物物理学特性研究进展. 湖南中医药大学学报. 2010;30:76-78.  [PubMed]  [DOI]
17.  Yan J, Chang XR, Wang C, Shen J, Wu HG. Function of Moxibustion Therapy in Disease Prevention and Healthcare. J Acupunct Tuina Sci. 2010;8:218-221.  [PubMed]  [DOI]
18.  杨 宗保, 吴 璇, 吴 海霞, 乔 玉丹, 曹 靖瑜, 熊 云. 艾灸胃经穴对大鼠胃黏膜损伤的修复效应研究. 江西中医学院学报. 2011;23:41-43.  [PubMed]  [DOI]
19.  易 受乡, 彭 艳, 常 小荣, 彭 娜, 严 洁, 林 亚平. 艾灸足三里、梁门穴对应激性溃疡大鼠胃黏膜细胞凋亡的干预作用. 世界华人消化杂志. 2006;14:3163-3168.  [PubMed]  [DOI]
20.  王 玮, 孙 梅. 胃肠黏膜抗损伤和修复新进展. 世界华人消化杂志. 2005;13:2355-2359.  [PubMed]  [DOI]
21.  刘 红, 葛 晓群. 转化生长因子a对消化性溃疡的修复作用研究进展. 国际消化病杂志. 2006;26:320-322.  [PubMed]  [DOI]
22.  胡 义亭, 甄 承恩. 转化生长因子a与胃粘膜修复关系的研究进展. 国外医学. 2001;21:137-141.  [PubMed]  [DOI]
23.  许 春娣, 袁 耀宗, 陈 舜年, 江 石湖, 徐 家裕, 甘 人宝. 体液中表皮生长因子水平变化与消化性溃疡愈合的关系. 上海医学. 2000;23:296-298.  [PubMed]  [DOI]
24.  常 小荣, 谢 华, 严 洁, 易 展, 刘 密, 易 受乡, 岳 增辉, 林 亚平, 宋 炯. 不同灸治时间对脾胃虚寒型浅表性胃炎胃肠激素的影响. 国际中医中药杂志. 2011;33:293-296.  [PubMed]  [DOI]
25.  王 加平. 消化性溃疡患者治疗前后血清GAS、TNF-a和TGF-a水平检测的临床意义. 淮海医药. 2009;27:502-503.  [PubMed]  [DOI]
26.  贺 建华, 罗 和生. 生长因子在消化性溃疡愈合中的作用. 国外医学. 2003;23:12-15.  [PubMed]  [DOI]
27.  张 绍荣. 三叶因子在消化性溃疡愈合过程中的作用及其机制. 中国实用内科杂志. 2006;26:302-304.  [PubMed]  [DOI]
28.  聂 时南, 孙 海晨, 吴 学豪, 钱 晓明. 三叶肽对胃黏膜适应性细胞保护的调节作用. 中国危重病急救医学. 2005;17:302-306.  [PubMed]  [DOI]
29.  卢 雅丕, 任 建林. 三叶因子家族研究进展. 世界华人消化杂志. 2003;11:2019-2021.  [PubMed]  [DOI]
30.  Muskhelishvili L, Latendresse JR, Kodell RL, Henderson EB. Evaluation of cell proliferation in rat tissues with BrdU, PCNA, Ki-67(MIB-5) immunohistochemistry and in situ hybridization for histone mRNA. J Histochem Cytochem. 2003;51:1681-1688.  [PubMed]  [DOI]
31.  刘 婧, 李 兆申, 许 国铭, 宛 新建, 王 雯. 细胞凋亡和增殖在大鼠应激性溃疡发病中的作用. 中华消化杂志. 2003;23:595-598.  [PubMed]  [DOI]
32.  李 晓泓, 张 露芬, 解 秸萍. 针灸预处理的研究概况与思考. 中国临床康复. 2005;9:186-187.  [PubMed]  [DOI]
33.  刘 密, 方 剑乔, 严 洁, 常 小荣, 王 超. 针灸与缺血预适应"第二保护窗". 中华中医药杂志. 2011;26:954-958.  [PubMed]  [DOI]
34.  张 淑君. 试论灸法"治未病". 中国针灸. 2008;28:739-741.  [PubMed]  [DOI]