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世界华人消化杂志. 2011-01-28; 19(3): 246-250
在线出版日期: 2011-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i3.246
TFF2在胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的表达及其与血管生成的关系
石磊, 赖铭裕, 梁志海, 刘诗权, 黄杰安, 唐国都, 姜海行
石磊, 赖铭裕, 广西医科大学第一附属医院老年消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
梁志海, 刘诗权, 黄杰安, 唐国都, 姜海行, 广西医科大学第一附属医院消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
石磊, 在读硕士, 主要从事胃癌发病机制方面的研究.
基金项目: 广西卫生厅自筹经费科研课题基金资助项目, No. Z2008111.
作者贡献分布: 石磊与赖铭裕对此文所作贡献均等; 此课题由赖铭裕、梁志海及黄杰安设计; 研究过程由石磊、刘诗权、唐国都及姜海行操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由赖铭裕提供; 数据分析由赖铭裕与石磊完成; 本论文写作由石磊与赖铭裕完成.
通讯作者: 赖铭裕, 副教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市, 广西医科大学第一附属医院老年消化内科. laimingyu2005103@yahoo.com.cn
收稿日期: 2010-09-21
修回日期: 2010-11-26
接受日期: 2010-12-01
在线出版日期: 2011-01-28

目的: 探讨三叶因子2(TFF2)、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)在胃癌发生、发展、浸润和转移中的作用.

方法: 选取广西医科大学第一附属医院2008- 01/2009-06接受胃大部切除术的胃癌标本50例, 采用SP免疫组织化学方法检测30例正常胃黏膜组织、50例癌旁组织和50例胃癌组织中TFF2、VEGF和MVD的表达情况.

结果: 正常胃黏膜组织→癌旁组织→胃癌组织中, TFF2表达呈逐渐减弱趋势(165.80±16.42, 184.44±19.02, 206.79±17.62, 均P<0.01), TFF2的表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有关(均P<0.01), 而VEGF的表达和MVD值呈逐渐上升趋势(36.7%, 42.0%, 72.6%; 26.35±4.54, 30.78±5.64, 40.13±6.92, 均P<0.01), 两者表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关(均P<0.01). TFF2与MVD的表达呈负相关(r = -0.781, P<0.01).

结论: TFF2作为一种胃癌的抑制因子, 在胃癌发展过程中表达逐渐减弱, 对胃癌的抑制作用降低, 同时一些促进肿瘤浸润转移的因子如VEGF、MVD表达水平逐渐增强, 促进了肿瘤的发展转移.

关键词: 三叶因子2; 血管内皮生长因子; 微血管密度; 胃癌; 免疫组织化学
引文著录: 石磊, 赖铭裕, 梁志海, 刘诗权, 黄杰安, 唐国都, 姜海行. TFF2在胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的表达及其与血管生成的关系. 世界华人消化杂志 2011; 19(3): 246-250
Correlation between TFF 2 expression and tumor angiogenesis in gastric carcinoma, adjacent carcinoma and normal gastric mucosa
Lei Shi, Ming-Yu Lai, Zhi-Hai Liang, Shi-Quan Liu, Jie-An Huang, Guo-Du Tang, Hai-Xing Jiang
Lei Shi, Ming-Yu Lai, Department of Geriatric Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
Zhi-Hai Liang, Shi-Quan Liu, Jie-An Huang, Guo-Du Tang, Hai-Xing Jiang, Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
Supported by: the Self-raised Foundation of Department of Public Health of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. Z2008111.
Correspondence to: Associate Professor Ming-Yu Lai, Department of Geriatric Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China. laimingyu2005103@yahoo.com.cn
Received: September 21, 2010
Revised: November 26, 2010
Accepted: December 1, 2010
Published online: January 28, 2011

AIM: To investigate the correlation among the expression of trefoil factor 2 (TFF2) and vascular endothelial growth factor (VEGF) and microvessel density (MVD) in gastric carcinoma.

METHODS: The expression of TFF2 and VEGF and MVD were determined by immunohistochemistry in 50 gastric carcinoma specimens, 50 tumor-adjacent gastric mucosal specimens, and 30 normal gastric mucosa specimens.

RESULTS: The expression level of TFF2 was highest in normal gastric mucosa, followed by tumor-adjacent gastric mucosa and gastric carcinoma (165.80 ± 16.42, 184.44 ± 19.02, 206.79 ± 17.62, all P < 0.01). The expression of TFF2 in gastric cancer was significantly associated with the degree of tumor differentiation and lymph node metastasis (both P < 0.01). The expression level of VEGF and MVD were lowest in normal gastric mucosa, followed by tumor-adjacent gastric mucosa and gastric carcinoma (36.7%, 42.0%, 72.6%; 26.35 ± 4.54, 30.78 ± 5.64, 40.13 ± 6.92, all P < 0.01). The expression of VEGF and MVD in gastric cancer were associated with tumor differentiation, invasion and lymph node metastasis (all P < 0.01). There is a negative correlation between the expression of TFF2 and MVD (r = -0.781, P < 0.01).

CONCLUSION: TFF2 may be a negative regulatory factor of gastric carcinogenesis. The expression of TFF2 is down-regulated during the development of gastric cancer, while that of VEGF and MVD are up-regulated during this process.

Key Words: Trefoil factor 2; Vascular endothelial growth factor; Microvessel density; Gastric cancer; Immunohistochemistry
0 引言

近年来, 关于胃癌发病机制的研究中, 三叶因子(trefoil factor, TFF)与胃癌的发生、发展逐渐引起关注. TFF2是TFF家族之一, TFF2作为TFF家族中唯一具有两个三叶型结构域(P-结构域), 这种结构的稳定性使其具有明显的抗酸、抗蛋白酶和抗热分解特性, 对胃肠道黏膜有保护和修复作用. TFF2与胃癌之间的关系尚不十分明确, 因此, 我们用免疫组织化学方法研究TFF2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和微血管密度(microvessel density, MVD)在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织的表达情况及其与各临床病理特征的关系, 初步探讨其在胃癌发生发展中的作用.

1 材料和方法
1.1 材料

选取广西医科大学第一附属医院2008- 01/2009-06接受胃大部切除术的胃癌标本50例, 均经组织病理学检查证实. 所有标本术前均未接受非甾体抗炎药治疗及放化疗. 男32例, 女18例, 年龄31-76(中位年龄54.7)岁. 其中高分化、中分化腺癌14例, 低未分化腺癌36例; 未侵及浆膜层者18例, 侵及浆膜层及浆膜外者32例; 发生局部淋巴结转移者30例, 无局部淋巴结转移者20例. 同时取距癌缘3-5 cm的癌旁组织50例, 正常胃黏膜组织30例作为对照组. 试剂采用鼠抗人TFF2单克隆抗体(工作浓度1∶100), 购自美国Abcam公司, 链霉菌抗生素蛋白-生物素-过氧化物酶(SP)免疫组织化学试剂盒、二氨基联苯(DAB)显色剂、鼠抗人VEGF单克隆抗体和鼠抗人CD34单克隆抗体均购自福建迈新生物技术开发公司.

1.2 方法

所有标本均经40 g/L甲醛固定, 常规脱水、透明、渗蜡、包埋, 4 μm厚连续切片. 常规脱蜡、水化, 采用免疫组织化染色超敏两步法(SP染色), DAB显色, 苏木素复染, 吹干, 具体操作按SP试剂盒说明书进行. 阴性对照采用生理盐水磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗, 以已知阳性病例作阳性对照. 操作严格按产品说明书进行. 评判标准: (1)TFF2: 阳性信号为细胞胞质和胞膜上出现黄色或棕黄色染色. 每例取5个高倍视野(×400), 用病理图像分析仪测定阳性信号平均灰度值, 灰度值越高, TFF2表达越弱; (2)VEGF: 阳性信号为细胞胞质和胞膜上出现黄色或棕黄色染色, 每张切片中看到有>5%的肿瘤细胞胞质或胞膜染色阳性, 即判定为VEGF阳性; (3)MVD: 被染成棕色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇均作为一个血管计数. 每例先在低倍镜(×100)下观察全片以确定肿瘤内血管密度最高处, 再在中倍镜(×200)下记录5个视野内的微血管数, 取其平均值作为该病例的MVD值.

统计学处理 使用统计学软件SPSS13.0进行分析, 计量资料采用mean±SD来表示, 组间均数比较采用单因素方差分析和SNK法检验, 计数资料比较采用χ2检验, 等级相关性采用Spearman等级相关分析, P<0.05为差异具有统计学意义.

2 结果
2.1 TFF2、VEGF在不同胃黏膜组织中的表达

TFF2在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中的阳性信号平均灰度值分别为165.80±16.42, 184.44±19.02和206.79±17.62, 各组间两两比较, 差异均有统计学意义(P<0.01); VEGF在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中的阳性表达率分别为36.7%(11/30), 42.0%(21/50)和72.6%(36/50), 各组间两两比较, 差异均有统计学意义(P<0.01, 图1, 2).

图1
图1 TFF2在不同胃黏膜组织中的表达(SP×400). A: 胃癌组织; B: 癌旁组织; C: 正常胃黏膜组织.
图2
图2 VEGF在不同胃黏膜组织中的表达(SP×400). A: 胃癌组织; B: 癌旁组织; C: 正常胃黏膜组织.
2.2 不同胃组织中MVD值

MVD在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的平均值分别为40.13±6.92, 30.78±5.64和26.35±4.54, 差异均有统计学意义(P<0.01, 图3).

图3
图3 MVD在不同胃黏膜组织中的表达(SP×400). A: 胃癌组织; B: 癌旁组织; C: 正常胃黏膜组织.
2.3 TFF2、VEGF和MVD表达与胃癌临床病理特征的关系

TFF2的表达与胃癌的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.01), 而VEGF的表达和MVD值呈逐渐上升趋势(P<0.01), TFF2的表达与患者的性别、年龄、胃癌的浸润程度无关. VEGF和MVD表达还与胃癌浸润深度程度有关(P<0.01, 表1).

表1 TFF2、VEGF和MVD的表达与临床病理特征的关系.
临床病理特征nTFF2(mean±SD)VEGF阳性率%(n)MVD(mean±SD)
性别
男32206.27±18.3271.9(23)40.25±7.46
女18207.71±13.5877.8(14)39.92±5.78
年龄(岁)
≥5529206.39±17.3075.9(22)39.93±7.25
<5521207.34±17.9366.7(14)40.41±6.32
分化程度
高中分化14197.63±15.5242.9(6)35.57±6.82
低未分化36210.35±16.47b80.5(29)b41.90±7.27b
浆膜浸润
有32207.45±15.7884.4(27)d41.75±7.36d
无18205.62±12.0944.4(8)37.25±6.19
淋巴结转移
有32211.47±14.89f84.5(27)f41.26±6.80e
无18198.47±14.4355.6(8)38.12±6.46
bP<0.01 vs 高中分化;
dP<0.01 vs 无浆膜浸润;
eP<0.05,
fP<0.01 vs 无淋巴结转移.
2.4 TFF2与血管生成关系的分析

TFF2在VEGF阳性表达组和阴性表达组中的阳性信号平均灰度值分别为211.34±17.29和198.09±12.16(P<0.01); VEGF阳性表达组和阴性表达组中MVD平均值分别为42.28±7.08和35.49±2.32, VEGF阳性表达组的MVD值高于阴性表达组中的MVD值(P<0.01); FF2与MVD的表达呈负相关(r = -0.781, P<0.01).

3 讨论

20世纪80年代发现TFF家族, 家族成员包括TFF1、TFF2及TFF3. TFF2是TFF家族中的重要成员, TFF2 在胃、十二指肠特异性表达, 主要由胃体颈黏液细胞、胃窦和幽门腺基底细胞和十二指肠布伦纳氏腺合成及分泌[1]. 已有大量研究发现TFF2对胃肠道有上皮保护和促进破损黏膜愈合的功能[2,3]. 还有研究发现TFF2蛋白有助于从损伤胃肠黏膜保护, 稳定黏液凝胶, 刺激上皮恢复原状, 并抑制相关炎症[4,5]. Shi等[6]研究发现TFF2在低分化胃癌组织中的表达均低于高分化胃癌, Dhar等[7]研究发现TFF2在有肿瘤浸润以及已出现淋巴结和血行转移患者中的表达明显增高. Yamachika等[8]则认为TFF2有抑制细胞黏附, 促进癌细胞侵袭, 阻断细胞凋亡的作用, 提出TFF可作为胃癌预后不良的标志物. 本研究结果显示, 正常胃黏膜组织→癌旁组织→胃癌组织中, TFF2表达呈逐渐减弱趋势(P<0.01), TFF2的表达与胃癌的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.01).

VEGF是1989年Ferrara等[9]从牛垂体滤泡星状细胞培养液首先纯化出来, 并发现具有促进血管内皮细胞有丝分裂的活性. VEGF被认为是肿瘤血管形成中最关键的驱动因子[10], 与微血管的形成密切相关, 而微血管的生成是直接影响胃癌浸润、转移和预后的重要因素. VEGF通过与细胞膜上的相应VEGF结合而发挥作用. 血管内皮生长因子受体(KDR)作为的一种表面受体, 与VEGF结合后可上调VEGF表达, 诱导肿瘤血管形成. VEGF直接刺激KDR阳性表达的肿瘤细胞, 提示在促进肿瘤生长和转移过程中起重要作用[11]. Lazăr等[12]则对高表达VEGF的胃癌组织进行了MVD检测, 结果显示MVD与VEGF之间存在明显正相关性.

血管生成是肿瘤细胞适应局部缺氧环境而发生的, 缺氧导致新生血管形成基因的表达, 是肿瘤生长和扩散的必要条件. 近年来有研究发现TFF家族成员TFF3可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成, 诱导人脐静脉内皮细胞形成类微血管结构, 提示其在血管生成中的作用[13], 我们以前的研究发现TFF1在胃癌发生发展过程中并未促进新生血管的生成[14].

目前有关TFF2和胃癌新生血管生成的研究较少, 本研究观察到在正常胃黏膜组织→癌旁组织→胃癌组织中, TFF2表达呈逐渐减弱趋势(P<0.01), 而VEGF、MVD表达率呈逐渐上升趋势(P<0.01); TFF2的表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.01), 而VEGF的表达和MVD呈逐渐上升趋势(P<0.01), 两者表达与肿瘤的分化程度、浸润深度(P<0.01)和淋巴结转移有关(P<0.05). TFF2与MVD的表达呈负相关(r = -0.781, P<0.01). 可认为在TFF2作为一种可能的胃癌特异性抑制因子, 其在胃癌发生发展过程中的表达逐渐减弱, 对胃癌的抑制作用降低, 同时一些促进肿瘤浸润转移的因子如VEGF、MVD表达水平逐渐增强, 促进了肿瘤的发展转移. TFF2在胃癌发生、发展中的作用及调控机制, 需要进一步研究.

评论
背景资料

血管生成是肿瘤生长和扩散的必要条件, VEGF被认为是肿瘤血管形成中最关键的驱动因子. 国外研究发现TFF1、TFF3具有同VEGF的血管生成作用, 但TFF2作为胃癌的一个抑制因子, 在胃癌的发生、发展过程中与血管生成的关系尚未阐明.

同行评议者

黄颖秋, 教授, 本溪钢铁(集团)有限责任公司总医院消化内科

相关报道

Shi等研究发现TFF2在低分化胃癌组织中的表达均低于高分化胃癌, Dhar等研究发现TFF2在有肿瘤浸润以及已出现淋巴结和血行转移患者中的表达明显增高.

创新盘点

本实验联合检测胃癌组织的TFF2、VEGF及MVD有助于了解TFF2在胃癌发病机制中的作用途径, 了解他与其他指标的相互关系,以及各观察指标在胃癌发病机制中各自的地位.

应用要点

本课题采用免疫组织化学技术对TFF2、VEGF及MVD在不同胃黏膜病变中的表达进行了检测分析, 结果提示TFF2在胃癌演进过程中起重要作用, 为胃癌的防治提供理论依据.

同行评价

本文学术性较好, 对于探讨胃癌的发生机制及其转归有一定的参考价值.

编辑:李薇 电编:何基才

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