修回日期: 2010-01-25
接受日期: 2010-01-26
在线出版日期: 2010-03-08
目的: 观察27种中药醇提液及5种中药提取油对肠道念珠菌(白念、热带、克柔氏)的体外抗菌活性.
方法: 采用试管药基法将27种中药醇提取液倍比稀释成浓度50-3.125 g/L, 中药提取油倍比稀释成5-0.0097 mL/L, 对肠道念珠菌进行MIC观察.
结果: 27种中药醇提取液中有6种(土槿皮、黄连、黄柏、五倍子、桂皮、丁香)MIC均值为1.56-3.25 g/L, 4种(广藿香、川芎、菖蒲、蛇床子)MIC均值12.5 g/L, 2种(五味子、小茴香)MIC均值50 g/L, 对念珠菌有不同程度的抑制作用, 其他15种中药醇提取液无抑制作用. 5种中药提取油(桂皮油、藿香油、丁香油、小茴香油、五味子油)对念珠菌均有较强的抑制作用.
结论: 6种中药醇提取液及5种中药提取油对念珠菌(白念、热带、克柔氏)均有较强的抑制作用.
引文著录: 邓洁华, 王刚生, 马耀辉, 史敏, 李波. 中药提取液体外抗肠道念珠菌的作用. 世界华人消化杂志 2010; 18(7): 741-743
Revised: January 25, 2010
Accepted: January 26, 2010
Published online: March 8, 2010
AIM: To investigate the antifungal activity of alcohol extracts of 27 traditional Chinese herbs (TCHs) and extracting oils from 5 TCHs against intestinal Candida (C. albicans, C. krusei, and C. tropicalis) in vitro.
METHODS: The alcohol extracts of 27 TCHs were serially diluted to concentrations ranging from 50 to 3.125 g/L, while the extracting oils from 5 TCHs were serially diluted to concentrations ranging from 5 to 0.0097 mL/L. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of these herb extracts against intestinal Candida were then determined.
RESULTS: The alcohol extracts of 6 (cortex pseudolaricis, coptis chinensis, phellodendron amurense, Chinese gall, cassia, and clove), 4 (patchouli, Chuanxiong, acorus calamus, and fructus cnidii), and 2 (fructus schizandrae and fennel) TCHs had mean MICs of 1.56 g/L to 3.25 g/L, 12.5 g/L, and 50 g/L, respectively. The alcohol extracts of the remaining 15 TCHs exhibited no antifungal effect. The extracting oils from 5 TCHs (cassia oil, Agastache rugosa oil, clove oil, small fennel oil, and fructus schizandrae oil) showed potent antifungal effect against intestinal Candida.
CONCLUSION: The alcohol extracts of 6 TCHs and extracting oils from 5 TCHs have significant antifungal activity against pathogenic Candida species (C. albicans, C. krusei, and C. tropicalis).
- Citation: Deng JH, Wang GS, Ma YH, Shi M, Li B. Antifungal effect of extracts of 32 traditional Chinese herbs against intestinal Candida in vitro. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2010; 18(7): 741-743
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v18/i7/741.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v18.i7.741
由于临床上广泛应用广谱抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂等, 使肠道真菌感染的发病率日益增加. 而抗真菌治疗的药物仍以西药为主: 价格昂贵、不良反应多, 易产生耐药菌株, 他们虽然对某些真菌感染有效, 但从高效、低毒、抗真菌谱和耐药性方面评价, 没有一种令人满意. 近年来, 许多国内外学者对中草药抗真菌实验做了大量的筛选工作, 发现有许多中草药及其提取物有很好的抗真菌作用[1-7]. 本研究用32种中药的提取液对肠道念珠菌(白念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌)进行体外抗菌活性的测定, 为治疗肠道念珠菌感染开发高效、低毒的天然药物奠定基础.
中药提取液: (1)醇提液: 土槿皮、黄连、黄柏、五倍子、桂皮、丁香、蛇床子、广藿香、五味子、川芎、菖蒲、小茴香、天冬、石榴皮、板蓝根、苦参、儿茶、乌梅、地肤子、马勃、虎杖、香附、决明子、半夏、川芎、石决明、蒲黄; (2)挥发油: 桂皮油、藿香油、丁香油、小茴香油、五味子油. 均由河北医科大学制药厂提取并提供. 念珠菌临床株: 来自我院真菌室, 均为致病性真菌(从肠道真菌病患者便中分离, 直接镜检可见大量菌丝及芽生孢子, 培养有酵母样菌落生长, 经鉴定为白念珠菌10株、热带念珠菌10株及克柔氏念珠菌10株). 标准株: 白念珠菌1株、热带念珠菌1株及克柔氏念珠菌1株, 均来自中科院微生物所.
1.2.1 药基配制: 将中药醇提取液及中药提取油(溶于950 mL/L乙醇内, 配成100 mL/L的药物母液)分别溶于高压灭菌(120 ℃, 0.1 Pa, 20 min)后的葡萄糖蛋白胨琼脂基(40 g/L葡萄糖, 10 g/L蛋白胨, 20 g/L琼脂)内, 趁热(60 ℃左右)充分混合, 中药醇提取液倍比稀释成50、25、12.5、6.25、3.125、1.56及0.78 g/L(以生药计算). 中药提取油倍比稀释成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039及0.0195 mL/L的系列药物浓度, 药物终浓度中乙醇不超过50 mL/L培养基, 每个试管5 mL放置斜面.
1.2.2 菌种接种: 挑取已活化的菌株, 加入8.5 g/L氯化钠溶液中, 用血细胞计数板将菌悬液浓度调节为1×108-9 CFU/L. 每个试管药基内接种100 μL菌悬液, 每个浓度接种2管, 置36 ℃恒温箱内, 每日观察生长情况, 并记录, 120 h后判读结果.
1.2.3 MIC值的判读: 用葡萄糖蛋白胨琼脂基加菌悬液管作阳性对照, 用葡萄糖蛋白胨琼脂基管作阴性对照. 将每管生长的情况与阳性及阴性对照管比较, 以无真菌生长的最低药物浓度药基管为MIC终点.
27种中药醇提液有6种(桂皮、丁香、五味子、土槿皮、黄连、黄柏)MIC均值1.56-3.25 g/L, 4种(广藿香、川芎、菖蒲、蛇床子)MIC均值12.5 g/L, 2种(五味子、小茴香)MIC均值50 g/L, 对肠道念珠菌(白念、热带、克柔氏)有不同程度的抑制作用, 见表1. 其他15种醇提液(天冬、石榴皮、板蓝根、苦参、儿茶、乌梅、地肤子、马勃、虎杖、香附、决明子、半夏、川芎、石决明、蒲黄)均无抑菌作用.
| 中药 | 白念临床株(n = 10) | 标准株(n = 1) | 热带临床株(n = 10) | 标准株(n = 1) | 克柔氏临床株(n = 10) | 标准株(n = 1) | |||
| 范围 | 均值 | 范围 | 均值 | 范围 | 均值 | ||||
| 桂皮 | 1.56-3.25 | 1.56 | 1.56 | 0.78-3.25 | 1.56 | 1.56 | 1.56-3.25 | 1.56 | 1.56 |
| 丁香 | 1.56-3.25 | 1.56 | 1.56 | 1.56-3.25 | 1.56 | 1.56 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 |
| 五倍子 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 | 0.78-3.25 | 1.56 | 1.56 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 |
| 土槿皮 | 1.56-6.25 | 3.25 | 3.25 | 1.56-6.25 | 3.25 | 3.25 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 |
| 黄连 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 | 3.25-12.50 | 6.25 | 6.25 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 |
| 黄柏 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 | 3.25-6.25 | 3.25 | 3.25 |
| 广藿香 | 6.25-25.00 | 12.50 | 12.50 | 6.25-12.50 | 6.25 | 6.25 | 6.25-12.50 | 6.25 | 6.25 |
| 川芎 | 6.25-25.00 | 12.50 | 12.50 | 12.50-25.00 | 12.50 | 12.50 | 12.50-25.00 | 25.00 | 25.00 |
| 菖蒲 | 12.50-25.00 | 12.50 | 12.50 | 6.25-12.50 | 12.50 | 12.50 | 12.50-25.00 | 25.00 | 25.00 |
| 蛇床子 | 12.50-25.00 | 12.50 | 12.50 | 12.50-25.00 | 25.00 | 25.00 | 12.50-25.00 | 25.00 | 25.00 |
| 五味子 | 25.00-50.00 | 50.00 | 50.00 | 25.00-50.00 | 50.00 | 50.00 | 25.00-50.00 | 50.00 | 50.00 |
| 小茴香 | 25.00-50.00 | 50.00 | 50.00 | 25.00-50.00 | 50.00 | 50.00 | 25.00-50.00 | 50.00 | 50.00 |
5种中药提取油(桂皮油、藿香油、丁香油、小茴香油、五味子油)对肠道念珠菌均有较强的抗菌作用, 抗菌作用依次为桂皮油(0.039 mL/L)、藿香油(0.078-0.156 mL/L)、丁香油(0.156-0.313 mL/L)、小茴香油(0.156-0.313 mL/L)、五味子油(0.313 mL/L), 见表2.
| 中药 | 白念临床株(n = 10) | 标准株(n = 1) | 热带临床株(n = 10) | 标准株(n = 1) | 克柔氏临床株(n = 10) | 标准株(n = 1) | |||
| 范围 | 均值 | 范围 | 均值 | 范围 | 均值 | ||||
| 桂皮油 | 0.019-0.039 | 0.039 | 0.039 | 0.039-0.019 | 0.039 | 0.039 | 0.039-0.078 | 0.078 | 0.078 |
| 藿香油 | 0.078-0.156 | 0.078 | 0.078 | 0.078-0.313 | 0.156 | 0.156 | 0.078-0.156 | 0.156 | 0.156 |
| 丁香油 | 0.156-0.313 | 0.156 | 0.156 | 0.078-0.313 | 0.156 | 0.156 | 0.078-0.156 | 0.156 | 0.156 |
| 小茴香油 | 0.078-0.313 | 0.156 | 0.156 | 0.156-0.625 | 0.313 | 0.313 | 0.078-0.313 | 0.156 | 0.156 |
| 五味子油 | 0.156-0.313 | 0.313 | 0.313 | 0.313-0.625 | 0.313 | 0.313 | 0.313-0.625 | 0.313 | 0.313 |
近年来, 许多学者对中草药抗真菌作用进行了大量的筛选试验, 发现许多种中草药具有抗真菌作用, 宫毓静等用164种中药乙醇提取物进行抗真菌作用研究, 发现黄连、土皮、肉桂、丁香、珊瑚姜、紫草素等有不同程度的抗真菌作用[8]. 相比较传统抗真菌药物如氟康唑, 中草药具有抗真菌作用强、不易耐药、低毒性等优点[9-11]. 且我们曾发现肉桂油对小鼠肠道念珠菌有抑制作用[12]. MIC值为抑制病菌生长繁殖的最低药物浓度, 测定抗真菌药物的MIC值为抗真菌药物临床应用提供实验依据, 并可进行致病真菌耐药的监测[9,13]. 中草药抗真菌MIC值测定, 为筛选抗真菌中草药提供依据. 由于各作者对中药提取方法以及提取有效成分不同, 抗真菌作用的MIC值出现差异. 经水煎或与培养基共同高压, 可使某些药物的有效成分破坏. 本实验采用了中药的醇提取液和提取油两种方法, 如: 桂皮油对念珠菌MIC(0.039 mL/L)、醇提液(1.56 g/L), 藿香油(0.078-0.156 mL/L)、醇提液(12.5 g/L), 丁香油(0.156-0.313 mL/L)、醇提液(1.56 g/L), 小茴香油(0.156-0.313 mL/L)、醇提液(50 g/L), 五味子油(0.313 mL/L)、醇提液(50 g/L), 抗念珠菌的效果也有明显差异, 中药提取油对念珠菌的抗菌作用优于中药醇提取液. 文献报道, 桂皮油、丁香油、八角茴香油、藿香油[14]、五味子油在1 mL/L以下的浓度下, 有很强的抗真菌作用. 本实验进一步证明了其抗菌作用. 因中药醇提取液、中药水提取液或中药提取的挥发油所做的体外抗真菌实验, 均为中药抗真菌初筛阶段. 为临床提供高效、低毒抗真菌制剂, 还需对中药抗真菌有效化学成分、作用机制及药理作用等进一步研究, 为合成新的抗真菌中药制剂奠定理论基础.
念珠菌感染在院内真菌感染中占首位, 肠道念珠菌感染仅次于下呼吸道占第2位, 以白念珠菌最多, 其次是热带念珠菌、克柔氏念珠菌, 由于临床上高效安全的抗真菌药物较少, 因此, 念珠菌感染的发病率呈上升趋势.
高国全, 教授, 中山大学中山医学院生化系.
念珠菌耐药株日渐增多, 目前, 抗真菌药物较多、不良反应较大, 且无良好的中药治疗.
宫毓静等用164种中药乙醇提取物进行抗真菌作用研究, 发现黄连、土皮、肉桂、丁香、珊瑚姜、紫草素等有不同程度的抗真菌作用.
本文研究了部分中药抗念珠菌的MIC值, 对比了中药醇提液与提取油的抗真菌活性.
本文探讨了多种中药提取液对肠道念珠菌的抑制效果, 为临床应用提供了基础依据, 具有一定的创新性.
编辑:李瑞敏 电编:吴鹏朕