基础研究 Open Access
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世界华人消化杂志. 2010-07-08; 18(19): 1964-1968
在线出版日期: 2010-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v18.i19.1964
酸奶对胃溃疡模型大鼠胃黏膜损伤的抑制作用
王超, 袁卫新, 祝闽辉, 陈健康, 赵玉峰
王超, 袁卫新, 祝闽辉, 中国人民解放军第四军医大学口腔医学系六队 陕西省西安市 710032
陈健康, 赵玉峰, 中国人民解放军第四军医大学基础医学实验部 陕西省西安市 710032
作者贡献分布: 此课题由王超、袁卫新及祝闽辉设计; 研究过程由祝闽辉、袁卫新及王超操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由陈健康提供; 数据分析由王超与袁卫新完成; 本论文写作由王超与祝闽辉完成; 本论文撰写由赵玉峰指导.
通讯作者: 陈健康, 710032, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学基础医学实验部. jkchen@fmmu.edu.cn
电话: 029-84773159
收稿日期: 2010-03-24
修回日期: 2010-05-18
接受日期: 2010-05-25
在线出版日期: 2010-07-08

目的: 观察酸奶对大鼠胃黏膜损伤的促进或抑制修复作用.

方法: 利血平0.5 mL/kg腹腔注射, 制作大鼠胃溃疡模型, 然后各组大鼠分别用酸奶, 纯奶, 生理盐水5 mL/kg每天1次灌胃, 7 d后, 处死并解剖大鼠. 观察胃黏膜损伤情况、测定胃黏膜中前列腺素E2(PGE2)的表达量、超氧化物歧化酶(SOD)表达量来评估酸奶对胃溃疡的损伤或修复作用.

结果: 3组大鼠胃黏膜均有点状出血, Guth积分法得出酸奶组较纯奶组积分少, 有统计学差异(1.33±0.577 vs 5.00±1.323, P<0.05), 镜下病理切片观察发现, 各组大鼠胃黏膜不同程度充血, 生理盐水组上皮严重脱落且腺体萎缩, 酸奶组损伤不明显, 仅有少量中性粒细胞浸润和上皮脱落. 酸奶组PGE2表达明显比生理盐水组表达量高, 有统计学差异(248.6±43.73 vs 79.52±31.74, P<0.05). 酸奶组SOD表达量比纯奶组低, 差异有统计学意义(148.1±2.18 vs 156.6±1.66, P<0.01).

结论: 酸奶对大鼠胃溃疡的恢复有一定的促进作用, 同时胃黏膜PGE2表达量升高, SOD表达量下降.

关键词: 胃溃疡; 酸奶; 超氧化物歧化酶; 前列腺素2

引文著录: 王超, 袁卫新, 祝闽辉, 陈健康, 赵玉峰. 酸奶对胃溃疡模型大鼠胃黏膜损伤的抑制作用. 世界华人消化杂志 2010; 18(19): 1964-1968
Yoghourt accelerates the recovery of gastric ulcer in rats
Chao Wang, Wei-Xin Yuan, Min-Hui Zhu, Jian-Kang Chen, Yu-Feng Zhao
Chao Wang, Wei-Xin Yuan, Min-Hui Zhu, Department of Stomatology (Division VI), the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi Province, China
Jian-Kang Chen, Yu-Feng Zhao, Department of Experimental Basic Medicine, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi Province, China
Correspondence to: Jin-Kang Chen, Department of Experimental Basic Medicine, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi Province, China. jkchen@fmmu.edu.cn
Received: March 24, 2010
Revised: May 18, 2010
Accepted: May 25, 2010
Published online: July 8, 2010

AIM: To investigate whether yoghourt accelerates the recovery of gastric ulcer in rats.

METHODS: Gastric ulcer was induced in rats by intraperitoneal injection of reserpine at a dose of 0.5 mL/kg. Rats with gastric ulcer were then divided into three groups: yoghourt group, milk group and sodium chloride group, which were intragastrically given yoghourt, milk and sodium chloride once (5 mL/kg) every other day, respectively. All animals were killed on day 7 after administration. The extent of mucosal lesions was evaluated based on Guth score. The levels of prostaglandin E2 (PGE2) and superoxide dismutase (SOD) in gastric mucosa were measured.

RESULTS: Punctiform erosion and hemorrhage were observed by naked eyes in rats of each group. Guth score was significantly lower in the yoghourt group than in the milk group (1.33 ± 0.577 vs 5.00 ± 1.323, P < 0.05) though there was no significant difference between the yoghourt group and sodium chloride group (P > 0.05). Epithelial cell necrosis and shedding and neutrophil infiltration of the propria lamina were observed by microscopy. The lesions in rats of the sodium chloride group were more severe than those in rats of the yoghourt group. The content of PGE2 in gastric mucosa was significantly higher in the yoghourt group than in the sodium chloride group (248.6 ± 43.73 vs 79.52 ± 31.74, P < 0.05) though no significant difference was observed between the yoghourt group and the milk group. The content of SOD in gastric mucosa was significantly lower in the yoghourt group than in the milk group (148.1 ± 2.18 vs 156.6 ± 1.66, P < 0.01), but showed no significant difference between the yoghourt group and the sodium chloride group.

CONCLUSION: Yoghourt exerts a positive effect on the recovery of gastric ulcer in rats possibly by increasing PGE2 content and decreasing SOD content.

Key Words: Gastric ulcer; Yoghourt; Superoxide dismutase; Prostaglandin E2


0 引言

消化系溃疡是机体在胃或肠黏膜出现的糜烂和溃疡, 是严重心理障碍和危重临床疾病的常见并发症, 是现代生活常见病[1,2]. 现代社会生活节奏加快, 压力大, 生活不规律, 损伤因素多, 胃溃疡的发病率因此有所提高, 同时因该病不一定出现症状, 潜在危害性较大. 有研究表明, 消化性溃疡, 可能与机体神经内分泌失调、胃黏膜屏障保护功能削弱及胃黏膜损伤因素作用相对增强等因素有关[3-8]. 发酵性酸奶是指以牛奶为原材料, 经过杀菌后接入乳酸菌经发酵后产生的乳产品. 具有调节消化系菌群平衡, 提高免疫力, 预防心血管疾病, 以及防癌抗癌的作用等[9-11]. 本实验选用注射利血平建立急性胃溃疡模型[12], 观察酸奶对大鼠急性胃黏膜损伤后愈合的促进作用. 以纯牛奶和生理盐水作为对照组. 测定包括胃黏膜损伤指数、胃黏膜光镜下改变、胃壁组织内前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)表达以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性的四项指标[12-17].

1 材料和方法
1.1 材料

健康成年SD大鼠27只, ♂, 体质量250-300 g, 由第四军医大学动物实验中心提供. SOD试剂盒(南京建成生物制剂公司), 甲醇, 生理盐水, 0.5 mol/L KOH甲醇溶液, 利血平注射液(天津药业集团有限公司, 生产批号080705), 0.1 mol/L NaOH溶液, 甲醛固定液, 冰醋酸, 酸奶、纯奶(西安东方乳业多鲜牌). 手术器械、缝合线、离心机、注射器(1 mL×2、5 mL×2)、752型分光光度计、紫外分光光度计、37 ℃恒温水浴锅、组织匀浆机、灌胃针头、移液枪(250 μL)、直尺.

1.2 方法

1.2.1 分组及造模[18]: 将所有大鼠于实验环境中适应性饲养7 d. 注射建立大鼠胃溃疡模型: 所有大鼠于第8日上午7:00开始禁食不禁水至第9日上午7:00. 第9日上午7:00各组动物均皮下注射利血平0.5 mL/kg. 造模结束后, 按照实验分组情况将大鼠随机分为3组, 分别为酸奶组、纯奶组、生理盐水组, 每组9只. 分装入3个笼子里, 记录好组别. 大鼠称体质量确定灌胃剂量, 剂量均为5 mL/kg体质量, 每天1次. 连续灌胃6 d. 于1 wk后处死全部大鼠.

1.2.2 胃壁观察及损伤程度测定: 剖腹取出大鼠胃, 结扎幽门贲门部, 用注射器由幽门部刺入胃幽门部吸取胃液备用. 将取下的胃沿大弯侧切开胃壁, 生理盐水冲洗净, 分离前后壁, 观察前壁内侧面. 用双盲法依Guth标准评定损伤指数: <1 mm为1分, 1-2 mm为2分, 2-3 mm为3分, 3-4 mm为4分, 并剪取一小块胃黏膜组织制成石蜡切片供组织学观察.

1.2.3 PGE2含量测定: 取离心胃液上清液0.05 mL, 加入0.5 mol/L KOH甲醇溶液0.2 mL, 在50 ℃下异构化20 min, 用甲醇稀释至2 mL, 空白对照组以蒸馏水代替胃液上清液, 于278 nm处测定其光吸收值. 根据Lipidus等的克分子吸收系数计算: PGE2含量 = E278×m/ε×D = E278×13.13×D(稀释倍数).

1.2.4 SOD活性测定: 用电子秤秤取胃组织0.5 g置于匀浆器, 加1 mL PDS溶液, 轻碾磨成匀浆. 离心取上清液, 放入-80 ℃保存. 然后按照试剂盒要求进行测定, 测得A值, 据标准曲线求得其含量, 胃黏膜中SOD活性用ng/dL表示.

1.2.5 切片制作: 以溃疡部位为中心修剪胃壁组织, 以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径中心取材, 切取含溃疡边缘约3 mm组织在内的溃疡组织块(正常组取胃前壁近幽门处的组织)约1.0 cm×1.2 cm大小, 一部分迅速置于甲醛中固定24 h, 石蜡包埋, 5 μm厚度切片, 备免疫组织化学使用及作HE染色(中性树脂封片, 光镜观察).

统计学处理 采用GraphPad Prism 5分析软件包进行统计学分析, 所有数据用mean±SD表示, 组间比较以独立样本秩和检验. P<0.05有统计学意义.

2 结果
2.1 一般状况

皮下注射利血平后, 大鼠当天表现为精神萎靡, 食欲不振, 第2天恢复. 灌胃期各组大鼠一般状况良好, 尤其是酸奶组大鼠活泼.

2.2 组织病理学

酸奶组上皮细胞少许脱落, 腺体结构完整, 充血及中性粒细胞浸润不明显(图1). 纯奶组上皮细胞有脱落, 腺体萎缩明显, 可见大范围的充血区, 中性粒细胞和淋巴细胞的浸润(图2). 生理盐水组上皮细胞脱落, 腺体严重萎缩, 黏膜下充血明显, 有中性粒细胞及淋巴细胞浸润(图3).

图1
图1 酸奶组细胞组织病理变化. A: 胃腺结构正常, 黏膜下层有少量炎细胞浸润; B: 胃腺横切面结构, 仅有少量腺体萎缩.
图2
图2 纯奶组细胞组织病理变化. A: 小鼠胃黏膜, 上皮结构破坏明显, 腺细胞大量萎缩; B: 胃黏膜横切面, 黏膜层充血明显, 中性粒细胞浸润.
图3
图3 生理盐水组细胞组织病理变化. A: 胃黏膜严重萎缩, 破坏明显, 胃腺萎缩成棘状; B: 胃黏膜横切面, 上皮细胞萎缩, 胃腺管腔增粗.
2.3 免疫组织化学各值的统计

解剖大鼠胃后, 用Guth积分法统计大鼠胃黏膜点状, 线状糜烂及出血. Guth积分比较, 酸奶组与纯奶组有统计学差异(P<0.05); 酸奶组与生理盐水组无统计学差异(P>0.05). PEG2比较, 酸奶组与生理盐水组有统计学差异(P<0.05), 酸奶组与纯奶组无统计学差异(P>0.05). SOD含量比较, 酸奶组与纯奶组有统计学差异(P<0.01), 酸奶组与生理盐水组无统计学差异(P>0.05, 表1, 图4).

表1 免疫组织化学各值的统计 (mean±SD).
分组Guth积分PEG2SOD含量
生理盐水组2.86±0.76679.52±31.74153.20±2.60
酸奶组1.33±0.577248.60±43.73148.10±2.18
纯奶组5.00±1.323173.80±35.97156.60±1.66
图4
图4 Guth积分法统计大鼠胃黏膜点状, 线状糜烂及出血. 1: 生理盐水组; 2: 酸奶组; 3: 纯奶组; A: Guth积分; B: PEG2; C: SOD.
3 讨论

现代医学表明, 胃酸和胃蛋白酶自身消化作用、幽门螺杆菌感染、服用非甾体抗炎药之外, 还可以由情绪波动、过度劳累、饮食失调、吸烟、酗酒等因素引起胃溃疡[19,20].

胃溃疡患者喝酸奶到底有益还是有害, 一直众说纷纭. 有人认为酸奶含有益生菌群有利于肠道环境的改善[21,22], 促进溃疡愈合[10], 也有人认为导致溃疡的一个重要原因就是胃酸分泌过多[3], 而酸奶含大量乳酸, 会加重溃疡进程.

本实验设置纯奶组、生理盐水组两对照组, 对比观察酸奶对胃溃疡大鼠模型愈合情况的影响. 胃黏膜受损以后, 上皮细胞产生和分泌PEG2, PEG2有促进胃黏膜屏障修复的功能[23], 扩张血管, 改善黏膜的血流供应, 故能维持黏膜细胞的氧气供给[24], 同时能清除和缓冲进入黏膜的H+, 保护胃黏膜[25,26], 因此本实验中选取PEG2评价酸奶对胃溃疡的修复作用. 实验结果显示, 酸奶组PEG2含量明显高于生理盐水组, 说明酸奶有利于胃黏膜损伤后PEG2的产生和释放, 促进溃疡愈合.

SOD含量与胃组织内超氧化物的含量有关[27], 氧自由基越多, SOD含量越多, 说明胃黏膜损伤因素越多[28,29]. 酸奶组的SOD含量明显低于纯奶组, 说明酸奶可能减少组织中的氧自由基, 对胃黏膜的修复有积极作用[30].

本实验双盲法测定的Guth积分表明酸奶组的胃溃疡Guth积分小于纯奶组, 表明酸奶组的溃疡面积较小. 组织病理学观察发现酸奶组腺体结构完整, 胃黏膜损伤较轻, 而纯奶组胃黏膜上皮细胞有脱落, 黏膜下大面积充血. 可见, 酸奶对胃黏膜的保护作用明显, 能明显的促进溃疡面的愈合, 保护黏膜上皮结构, 减轻炎症反应和充血.

通过该实验可以解决酸奶对胃溃疡有益还是有害的争议, 初步证实了酸奶能通过促进上皮细胞产生和分泌PEG2以促进胃黏膜保护屏障的形成, 以及通过减少组织中的氧自由基, 促进胃溃疡的愈合.

评论
背景资料

有人认为酸奶含有益生菌群有利于肠道环境的改善, 促进溃疡愈合, 也有人认为导致溃疡的一个重要原因就是胃酸分泌过多, 而酸奶含大量乳酸, 会加重溃疡进程. 胃溃疡患者喝酸奶到底有益还是有害, 一直众说纷纭.

同行评议者

潘秀珍, 教授, 福建省立医院消化内科

研发前沿

该研究领域的热点在于具体是酸奶中哪种有效成分能够促进胃溃疡愈合以及SOD、PEG2如何通过对其下游通路的调节作用, 从分子水平改善胃黏膜细胞微环境, 促进细胞修复, 减少炎症发生.相关报道

有研究表明, 消化性溃疡, 可能与机体神经内分泌失调、胃黏膜屏障保护功能削弱及胃黏膜损伤因素作用相对增强等因素有关.

创新盘点

本实验选用了比较系统的评定指标, 包括从肉眼观察, 组织病理学分析到免疫组织化学分析. 能够从微观到宏观的了解小鼠胃溃疡的变化情况.

同行评价

本文是前瞻性实验性研究, 立题重点明确, 研究内容集中, 实验材料与方法规范, 结果可信, 观点明确, 有一定的先进性, 对临床消化性溃疡的防治有参考意义.

编辑 李军亮 电编 吴鹏朕

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