临床经验 Open Access
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世界华人消化杂志. 2009-11-28; 17(33): 3460-3464
在线出版日期: 2009-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i33.3460
血清VEGF及CRP表达对肝细胞癌术后早期复发的预测
马立辉, 周健, 王助新, 胡大为, 史丽民, 敖亚洲, 张海峰
马立辉, 王助新, 胡大为, 史丽民, 敖亚洲, 张海峰, 承德医学院附属医院肿瘤外科 河北省承德市 067000
周健, 承德医学院附属医院老年病科 河北省承德市 067000
作者贡献分布: 马立辉与周健对此文贡献均等; 此课题由马立辉和周健设计; 研究过程由马立辉、周健、王助新、胡大为、史丽民、敖亚洲及张海峰共同完成; 研究所用试剂及分析工具由胡大为提供; 数据分析由马立辉与周健完成; 本论文写作由马立辉、周健及王助新共同完成.
通讯作者: 胡大为, 主任医师, 067000, 河北省承德市南营子大街36号, 承德医学院附属医院肿瘤外科. malihui3939@sina.com
电话: 0314-2065898
收稿日期: 2009-10-12
修回日期: 2009-11-07
接受日期: 2009-11-16
在线出版日期: 2009-11-28

目的: 探讨肝细胞癌(HCC)患者术前周围血血清中血管内皮生长因子(VEGF)和C-反应蛋白(CRP)表达水平与肝癌术后早期复发的关系及对其预测价值进行比较.

方法: 运用Sandwich酶联免疫吸附测定法定量检测32例HCC术前、30例肝脏良性疾病患者和20例健康人血清中VEGF的含量; 运用单向免疫扩散法检测上述病例的CRP水平.

结果: HCC组术前血清VEGF、CRP表达水平与肝脏良性疾病组、健康人组比较, 均有显著性差异(432.32±340.57 ng/L vs 158.54±120.58 ng/L, 124.03±51.65 ng/L; 9.80±0.86 mg/L vs 6.48±0.98 mg/L, 6.12±0.80 mg/L, 均P<0.01). VEGF和CRP预测肝癌复发的灵敏度和特异度分别为77.27%、30%; 59.09%、60%.

结论: HCC患者术前血清VEGF、CRP表达水平, 可能是预测HCC术后早期复发的一个较好的生物学指标.

关键词: 肝细胞癌; 血管内皮生长因; C-反应蛋白
引文著录: 马立辉, 周健, 王助新, 胡大为, 史丽民, 敖亚洲, 张海峰. 血清VEGF及CRP表达对肝细胞癌术后早期复发的预测. 世界华人消化杂志 2009; 17(33): 3460-3464
Use of preoperative serum VEGF and CRP levels for prediction of postoperative early recurrence in patients with hepatocellular carcinoma
Li-Hui Ma, Jian Zhou, Zhu-Xin Wang, Da-Wei Hu, Li-Min Shi, Ya-Zhou Ao, Hai-Feng Zhang
Li-Hui Ma, Zhu-Xin Wang, Da-Wei Hu, Li-Min Shi, Ya-Zhou Ao, Hai-Feng Zhang, Department of Oncosurgery, the Affiliated Hospital of Chengde Medical University, Chengde 067000, Hebei Province, China
Jian Zhou, Department of Geriatrics, the Affiliated Hospital of Chengde Medical University, Chengde 067000, Hebei Province, China
Correspondence to: Da-Wei Hu, Department of Oncosurgery, the Affiliated Hospital of Chengde Medical University, Chengde 067000, Hebei Province, China. malihui3939@sina.com
Received: October 12, 2009
Revised: November 7, 2009
Accepted: November 16, 2009
Published online: November 28, 2009

AIM: To investigate the correlations between liver cancer recurrence and preoperative serum vascular endothelial growth factor (VEGF) and C-reactive protein (CRP) levels in patient with hepatocellular carcinoma.

METHODS: The levels of serum VEGF and CRP in 32 liver cancer patients, 30 patients with benign liver diseases and 20 healthy controls were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and single immunodiffusion, respectively.

RESULTS: The levels of serum VEGF and CRP in hepatocellular carcinoma patients were significantly higher than those in patients with benign liver diseases and healthy controls (VEGF: 432.32 ± 340.57 ng/L vs 158.54 ± 120.58 ng/L and 124.03 ± 51.65 ng/L; CRP: 9.80 ± 0.86 mg/L vs 6.48 ± 0.98 mg/L and 6.12 ± 0.80 mg/L, all P < 0.01). The sensitivity and specificity of preoperative serum VEGF and CRP levels for prediction of postoperative early recurrence in patients with hepatocellular carcinoma were 77.27% and 59.09% as well as 30% and 60%, respectively.

CONCLUSION: Preoperative serum VEGF and CRP levels are potential predictors of postoperative early recurrence in hepatocellular carcinoma patients.

Key Words: Hepatocellular carcinoma; Vascular endothelial growth factor; C-reactive protein
0 引言

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)临床甚为常见, 在我国其死亡率居恶性肿瘤第2位. 早期肝切除术是其最主要的治疗手段, 但术后复发较高, 预后较差. 如何早期预测术后复发以便及时采取相应的治疗措施是临床关注的一个课题. 本文拟对HCC患者术前血清内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)的表达水平与HCC术后复发转移之间的关系进行探讨, 并对预测术后早期复发的价值进行比较.

1 材料和方法
1.1 材料

32例HCC均为接受肝切除术的患者, 年龄32-80(平均52)岁. 良性肝脏疾病30例, 包括肝脏良性肿瘤12例和18例肝硬化, 男:女为20:9, 年龄35-72(平均48)岁. 健康正常人20例, 男:女为4:1, 年龄21-31(平均25)岁. 患者入选标准: 能接受肝切除术的原发性肝癌患者, 无引起VEGF和CRP升高的其他疾患, 如其他肿瘤、急性炎症、类风湿及风湿活动期、组织坏死、结缔组织病等, 术前未进行全身化疗或经导管肝动脉栓塞治疗(transcatheter arterial chemoembolization, TACE)等.

1.2 方法

1.2.1 VEGF检测: 所有32例患者均为临床确诊的原发性肝癌患者. 入院后抽取4 mL空腹外周静脉血, 室温静置1 h, 离心1000 r/min, 10 min, 吸取血清分装后于-70 ℃冰箱保存备用. 应用Sandwich酶联免疫吸附测定法定量检测VEGF.

1.2.2 CRP检测: 32例原发性肝癌患者, 术前常规静脉采血, 采用单向免疫扩散法测定血清CRP水平.

统计学处理 运用SPSS12.0软件处理数据. 计量资料以mean±SD表示, 计数资料采用χ2检验, 计量资料采用t检验. 以P<0.05为有统计学意义.

2 结果
2.1 VEGF及CRP在各组血清中表达水平

VEGF及CRP在各组血清中的表达水平以原发性肝癌组最高, 而在肝脏良性肿瘤、肝硬化、正常人表达较低(表1).

表1 VEGF及CRP在各组血清中的表达.
分组nVEGF(ng/L)
CRP(mg/L)
mean±SDF值P值mean±SDF值P值
原发性肝癌32432.32±340.579.80±0.86
肝脏良性疾病30158.54±120.5815.74<0.016.48±0.9888.87<0.01
良性肿瘤12158.05±181.348.16<0.016.48±1.0257.77<0.01
肝硬化18158.68±94.1111.66<0.016.48±0.4669.52<0.01
正常人20124.03±51.6510.39<0.016.12±0.80165.55<0.01
2.2 VEGF和CRP在肝脏疾病中的表达

依据正常人血清VEGF均值(124.03±2 ng/L)可以计算出VEGF正常值为227.33 ng/L. 以此为标准判定32例HCC血清标本中, VEGF表达阳性率为75.0%(24/32); 而在肝脏良性疾病30例中表达阳性率为23.3%(7/30); 20例正常人VEGF表达阳性率仅为5%(1/20)(表2). CRP≥8 mg/L为阳性, <8 mg/L为阴性. 32例HCC患者血清表达阳性率为53.1%(17/32); 肝脏良性疾病30例中血清表达阳性率为20.0%(6/30); 20例正常人CRP表达阳性率为15.0%(3/20)(表2).

表2 VEGF及CRP在肝脏患者血清中的表达.
分组nVEGF表达n(%)
χ2值P值CRP表达n(%)
χ2值P值
阴性阳性阴性阳性
原发性肝癌328(25.0)24(75.0)15(46.9)17(53.1)
肝脏良性疾病3023(76.7)7(23.3)30.24<0.0124(80.0)6(20.0)11.29<0.01
正常人2019(95.0)1(5.0)9.21<0.0117(85.0)3(15.0)5.99<0.01
2.3 术前血清VEGF和CRP水平与术后2年内复发的关系

本试验共32例HCC患者中, 术后2年内临床影像学检查及AFP检测证实为肝癌复发者为22例. 32例HCC患者术前CRP阳性的患者17例, 其中2年内复发的患者13例, 灵敏度为59.09%, 特异度为60%. 32例HCC患者术前VEGF阳性的患者24例, 其中2年内复发的患者17例, 灵敏度为77.27%, 特异度为30%. 2项均阳性对肝癌复发诊断的灵敏度为45.45%, CRP与VEGF至少一项阳性作为判断标准, 灵敏度上升到95%, 特异度为40.9%.

3 讨论

肿瘤术后复发转移是恶性肿瘤的一个重要特征, 是导致患者死亡的重要原因. 癌细胞的转移过程在肿瘤细胞生成的早期就已发生, 因此早期预测肿瘤术后复发以便及时采取治疗措施就显得十分重要.

HCC根治术后肝内复发转移较易出现[1]. 一般认为肝癌术后5年复发率可高达45.2%-60%, 尤以术后2年内复发占大多数, 即便是小肝癌术后的复发率也比较高, 这是由于肝脏是一个体积较大的实体器官, 且具有丰富的血管网及丰富的血管窦, 为癌细胞在肝内的播散提供了有利条件[2-4].

甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)是较敏感、特异的肝癌诊断和随访的生物学指标, 但他并不能在治疗之前及转移灶出现之前预测肿瘤早期转移复发. 而VEGF及CRP的测定可弥补这方面的不足. 近年来, 肿瘤分子生物学有了飞速的发展, 有关肿瘤血管形成与肿瘤侵袭转移的关系已成为研究热点. VEGF是目前已知作用最强的促血管生成因子之一[5]. 很多肿瘤细胞可分泌VEGF, 其可诱导形成肿瘤血管, 并增加血管通透性, 协助肿瘤细胞进入脉管系统, 支持肿瘤侵袭转移[6-7]. 越来越多的资料显示肿瘤患者复发及预后和VEGF的高表达密切相关[8-9]. 研究显示肿瘤血管的形成是肿瘤生长、侵袭、转移过程中的重要环节, 他不仅提供了肿瘤生长所需的营养, 排除代谢产物, 而且也提供了癌细胞播散的途径. 当肿瘤生长到2-3 mm时, 需要从微血管网获得营养[10]. 文献报道, VEGF在肺腺癌、膀胱癌、纤维肉瘤、神经胶质瘤、胃癌、大肠癌、胰腺癌等各种肿瘤细胞均有表达[5], 而且VEGF表达还是结肠癌肝转移、胃癌肝转移及其他肿瘤发生转移的预测指标[11-12].

Jinno et al[7]研究发现, 血清VEGF水平在正常人组、肝炎组、肝硬化组及HCC组随着肝脏疾病的进展而逐步升高, HCC组VEGF的水平与其他组患者有显著性差异, 血浆中VEGF水平是确定肝转移的有效指标[13-14]. 本研究结果显示: 血清VEGF的水平在HCC与良性肝病、健康对照组之间有显著性差异(P<0.01).

CRP亦称丙种反应蛋白, 他是由5个完全相同的球体状单体组成, 主要在白介素-6(Interleukin-6, Il-6)介导下由肝脏产生, 少量由外周血淋巴细胞合成[15]. 与肺炎双球菌C多糖体起反应的急性时相反应蛋白, 广泛存在于血液及其他体液中[16], 其可由致炎细胞因子进行调节. CRP升高主要见于化脓性感染、组织坏死、恶性肿瘤、结缔组织疾病、器官移植、急性排斥、风湿活动期等[17-18], 随着组织结构和功能的恢复, 其血清浓度也随之恢复正常, 近年CRP与肿瘤的关系逐渐引起学者的注意, 其中与大肠癌[19-21]、肾细胞癌[22]、肺癌[23]和食管癌[24-25]的关系已经有了较多的临床观察结果, 许多研究表明, 恶性肿瘤时, 血浆CRP水平明显升高, 并且与肿瘤的进展和预后有相关性, Chang对结肠癌的研究显示, CRP的水平与肿瘤的分期和复发明显相关[20], Guilem研究了67例食管癌, 发现CRP血清浓度高者生存率要低于CRP低者[25]. Miyata对92例肾细胞癌的研究也发现, CRP虽然不是肾细胞癌的独立预测因子, 但与生存率明显相关[26]. 值得提出的是目前对CRP与肿瘤的相关性认识尚不统一, 研究结果甚至得出截然相反的结论, Lin对比研究了122例肝硬化的未治疗肝癌和76例肝硬化的血清CPR水平, 结果发现, 两者之间无显著性差异[25], 但其在单独比较了弥漫型肝癌和肝硬化后发现, 前者的CRP水平明显高于后者, Zhan对直肠癌做了大宗病例的前瞻性研究发现CRP与发生结肠癌的风险无相关性[21], 但另一学者Erlinger同样对直肠癌做了大宗前瞻性研究, 结论恰与Zhan的结论相反, CRP能增加结肠癌的风险[28]. 亦有研究证明CRP与肝硬化、肝细胞癌有某些联系[29-30].

上述报道证明CRP与肿瘤的相关性一直存在争议, CRP与肿瘤的关系如何, 尚需大量的临床和实验研究.

本组病例HCC患者, 肝功能无异常, 无引起CRP升高的上诉其他疾病, 因此可认为本组HCC病例术前CRP升高可能系HCC所致. 学者Lin et al[31]研究发现, 瘤体旁有子灶及弥漫型病例血清CRP水平明显高于单病灶病例, 提示肝癌的病期或恶性生物学行为可能与血清CRP水平的提高有一定关系.

本组实验数据显示, 与肝脏良性病变的患者、正常对照组患者相比, HCC患者的血清CRP水平明显升高, 血清CRP的水平在HCC与良性肝病、健康对照组之间有显著性差异(P<0.01). 本试验共32例HCC患者中, 术后2年内临床影像学检查及AFP检测证实为肝癌复发者为22例. 32例HCC患者术前CRP阳性的患者17例, 其中2年内复发的患者13例, 灵敏度为59.09%, 特异度为60%. 32例HCC患者术前VEGF阳性的患者24例, 其中2年内复发的患者17例, 灵敏度为77.27%, 特异度为30%. 2项均阳性对肝癌复发诊断的灵敏度为45.45%, CRP与VEGF至少一项阳性作为判断标准, 灵敏度上升到95%, 特异度为40.9%. 通过本实验的数据的分析, 对于高水平的CRP和VEGF血清浓度的患者, 要警惕肝癌复发的可能, 血清CRP和VEGF的联合检测对肝癌复发的诊断有互补作用.

评论
背景资料

肝细胞癌在我国甚为常见, 术后5年内极易复发, 严重影响了肝细胞癌的预后, 采用什么方法能够早期预测肝细胞癌的复发是临床关注的重要课题.

同行评议者

钱林学, 教授, 首都医科大学附属北京友谊医院消化内科

研发前沿

肝细胞癌患者术前VEGF和CRP水平能否成为预测肝细胞癌术后早期复发的有效指标, 是当前研究的热点, 当前对其认识尚不统一, 尚应进行大量的临床试验和研究来证实.

应用要点

本文研究发现, 肝细胞癌患者术前VEGF与CRP水平与肝细胞癌术后早期复发有一定关系, 与肝脏良性疾病组、健康人组相比有显著性差异. 证实血清CRP和VEGF的联合检测对肝癌复发的诊断有互补作用.

同行评价

本文选题很好, 尤其是肝癌和C-反应蛋白(CRP)表达水平的研究文章较少, 结论有较好的参考价值.

编辑: 李军亮 电编: 吴鹏朕

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