临床研究 Open Access
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世界华人消化杂志. 2009-11-08; 17(31): 3214-3217
在线出版日期: 2009-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i31.3214
HPV16与新疆维吾尔族食管鳞癌的相关性
周素明, 伊力亚尔•夏合丁, 杨婷, 张力为, 阿仙姑•哈斯木, 卢晓梅, 买地尼也提•尼亚孜, 刘涛
周素明, 伊力亚尔•夏合丁, 张力为, 卢晓梅, 买地尼也提•尼亚孜, 新疆医科大学第一附属医院胸外科 新疆维吾尔自治区食管癌研究所 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054
杨婷, 刘涛, 新疆医科大学第一临床医学院医学研究中心 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054
阿仙姑•哈斯木, 新疆医科大学基础医学院 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054
周素明, 新疆医科大学在读硕士研究生, 主要从事食管癌的基础与临床研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30960383.
作者贡献分布: 此课题的设计与论文写作由周素明和伊力亚尔•夏合丁完成; 研究过程由周素明、杨婷、卢晓梅、买地尼也提•尼亚孜及刘涛操作完成; 数据分析由周素明、张力为、阿仙姑•哈斯木及伊力亚尔•夏合丁完成.
通讯作者: 伊力亚尔•夏合丁, 教授, 主任医师, 博士生导师, 830054, 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市鲤鱼山路1号, 新疆医科大学第一附属医院胸外科, 新疆维吾尔自治区食管癌研究所. ilyarsha@hotmail.com
电话: 0991-4366286 传真: 0991-4327997
收稿日期: 2009-09-12
修回日期: 2009-10-31
接受日期: 2009-11-02
在线出版日期: 2009-11-08

目的: 调查新疆维吾尔族食管鳞癌患者中人乳头瘤状病毒(HPV)16型的感染率.

方法: 采用PCR技术检测82例新疆维吾尔族食管鳞癌和80例癌旁正常食管黏膜石蜡包埋组织HPV16的感染率, 分析其与新疆维吾尔族食管鳞癌发生的关联性.

结果: 在新疆维吾尔族食管鳞癌组织中, HPV16型检出率为31.7%(26/82), 与对照组12.5%(10/80)相比, 差异有统计学意义(χ2 = 8.643, P<0.05); 按照年龄、性别、病理分化程度及临床分期对维吾尔族食管鳞癌中的HPV16感染状况比较, 差异均无统计学意义(χ2 = 0.301、0.149、2.876、0.105, 均P>0.05).

结论: HPV16型感染与新疆维吾尔族食管鳞癌的发生存在一定的相关性, 但与患者的年龄、性别、病理分化程度及临床分期无明显的关联性.

关键词: 人乳头瘤状病毒16型; 食管鳞癌; 聚合酶链式反应
引文著录: 周素明, 伊力亚尔•夏合丁, 杨婷, 张力为, 阿仙姑•哈斯木, 卢晓梅, 买地尼也提•尼亚孜, 刘涛. HPV16与新疆维吾尔族食管鳞癌的相关性. 世界华人消化杂志 2009; 17(31): 3214-3217
Relationship between human papillomavirus 16 and esophageal squamous cell carcinoma in Uygur population in Xinjiang Uygur Autonomous Region
Su-Ming Zhou, Ilyar Sheyhidin, Ting Yang, Li-Wei Zhang, Ayxiam Hasim, Xiao-Mei Lu, Medinyet Niyaz, Tao Liu
Su-Ming Zhou, Ilyar Sheyhidin, Li-Wei Zhang, Xiao-Mei Lu, Medinyet Niyaz, Department of Thoracic Surgery, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Esophageal Cancer Research Institute of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumuqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Ting Yang, Liu Tao, Medical Research Center, the First Teaching Hospital of Xinjiang Medical University, Urumuqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Ayxiam Hasim, Preclinical Medical College, Xinjiang Medical University, Urumuqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by: National Natural Science Foundation of China, No. 30960383.
Correspondence to: Professor Ilyar Sheyhidin, Department of Thoracic Surgery, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Esophageal Cancer Research Institute of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumuqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China. ilyarsha@xj.cninfo.net
Received: September 12, 2009
Revised: October 31, 2009
Accepted: November 2, 2009
Published online: November 8, 2009

AIM: To investigate the infection rate of human papillomavirus 16 (HPV16) in Uygur patients with esophageal squamous cell carcinoma in Xinjiang.

METHODS: Eighty-two paraffin-embedded specimens of esophageal carcinoma and 80 tumor-adjacent specimens were used in the study. The presence of HPV16 in these specimens was detected by high-sensitivity polymerase chain reaction (PCR) using the type-specific E6 primers.

RESULTS: The infection rates of HPV16 in esophageal squamous cell carcinoma and tumor-adjacent tissue were 31.7% (26/82) and 12.5% (10/80), respectively, showing significant difference between the two groups. HPV16 infection was not correlated with patient's age and sex as well as pathological differentiation and clinical stage of the carcinoma (χ2 = 0.301, 0.149, 2.876 and 0.105, respectively; all P > 0.05).

CONCLUSION: HPV 16 infection is possibly correlated with esophageal squamous cell carcinoma in Uygur population in Xinjiang but showed no correlation with patient's age and sex as well as pathological differentiation and clinical stage of the carcinoma.

Key Words: Human papillomavirus 16; Esophageal squamous cell carcinoma; Polymerase chain reaction
0 引言

人类乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)是一种DNA肿瘤病毒, 与多种肿瘤发生有关, 且其致癌性已在宫颈癌中得到证实. 高危型HPV(16型)有2种可转化基因产物E6、E7蛋白, 他们可干扰抑癌基因如p53、Rb使其失去正常功能. 近年来, 随着HPV与人类恶性肿瘤的关系的深入研究, 有关HPV与食管癌的研究也有大量的报道. Lu et al[1]通过INNO-LiPA HPV基因分型技术检测67例新疆哈萨克族食管癌患者中的HPV, 检出率为30%. 最近刘红彦 et al[2]提出HPV可能是宫颈癌与食管癌2种肿瘤的共同致病因素. 拉莱•苏祖克 et al[3]研究发现维吾尔族妇女子宫颈癌HPV感染率高达94%. 由于食管与宫颈有相似的鳞状上皮, 且HPV易侵袭人类皮肤黏膜, 我们推测HPV感染与新疆维吾尔族食管癌发生可能有关系. 因此, 本研究采用聚合酶链反应(PCR)技术对新疆维吾尔族食管鳞癌和癌旁正常食管黏膜标本中的HPV16型感染状况进行检测和分析, 初步探讨HPV16感染与维吾尔族食管鳞癌发生的相关性, 为本地区维吾尔族食管癌积累流行病学资料及干预治疗提供生物学依据.

1 材料和方法
1.1 材料

收集新疆医科大学第一附属医院胸外科手术切除的维吾尔族食管癌标本82例, 并取同组远离癌灶近端手术切缘标本80例(其中非典型增生上皮18例, 正常食管黏膜62例). 82例食管癌标本经病理诊断均为鳞癌(其中高分化鳞癌30例, 中分化鳞癌42例, 低分化鳞癌10例). 82例食管鳞癌患者, 男56例, 女26例, 平均年龄为57±9岁, 所有患者术前均未做过任何放疗和化疗.

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取: 用德国Qiagen公司石蜡块组织DNA提取试剂盒抽提患者不同部位组织标本中DNA.

1.2.2 引物的合成: 引物由TaKaRa Biotechnology 公司(Dalian)合成. 通过复习文献[4]选择引物, 引物序列和扩增目的基因片段长度, 见表1.

表1 目的基因HPV16E6及内参基因β-actin的引物序列.
引物名称引物序列产物长度(bp)
HPV16E6
ForTCAAAAGCCACTGTGTCCTG120
RevCGTGTTCTTGATGATCTGCA120
β-actin
ForTCACCCACACTGTGCCCATCT106
RevGTGAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGTC106

1.2.3 PCR检测HPV16 E6: 所有标本处理完毕、进行HPV PCR 方法检测之前, 先行β-actin PCR作为内对照, 检测DNA的质和量. 剔除β-actin PCR阴性或弱阳性标本. 对质和量符合要求的标本, 行HPV16 E6 PCR检测. PCR反应体系为: 10×PCR缓冲液2.5 μL, 0.2 μmol/L的引物(HPV 16 E6 For、HPV16 E6 Rev, 200 μmol/L) 的各种dNTP 和0.5 U Taq DNA 聚合酶, 加双蒸水至20 μL. 反应条件: 95 ℃预变性4 min, 94 ℃变性45 s, 52.4 ℃复性45 s, 72 ℃延伸45 s, 共35 个循环, 然后72 ℃再延伸7 min. 阳性对照为SiHa细胞DNA (新疆医科大学基础医学院实验室赠)(为HPV- 16阳性), 阴性对照选择PCR扩增未见特异目的片段的正常食管样本, 空白对照以水为模板. 取10 μL PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳(电压120 V), 30 min后在紫外线凝胶成像仪下观察结果并拍照.

1.2.4 测序: PCR产物由上海生物制品有限公司纯化并测序.

统计学处理 采用SPSS16.0统计软件, χ2检验进行统计学处理.

2 结果
2.1 新疆维吾尔族食管鳞癌和正常食管黏膜组织中的HPV16型

新疆维吾尔族食管鳞癌组织中HPV16检出率与对照组相比, 差异有统计学意义(χ2 = 8.643; P<0.05, 图1-2, 表2).

图1
图1 β-actin PCR扩增电泳图. M: 100-2000 bp Marker; 1-6: 食管鳞癌模板DNA β-actin PCR扩增结果, 长度为106 bp.
表2 病例组与对照组HPV16型感染率 n(%).
分组nHPV+HPV-χ2值P值
食管鳞癌8226(31.7)56(68.3)8.6430.003
正常食管黏膜8010(12.5)70(87.5)
图2
图2 HPV16 E6 PCR扩增电泳图. M: 100-600 bp Marker; 1-6: 食管鳞癌组织HPV16 E6 PCR扩增的阳性结果, 可见一明显条带, 长度为120 bp.
2.2 患者临床病例特征与HPV16感染的相关性

按照年龄、性别、病理分化程度、TNM分期对新疆维吾尔族食管鳞癌中的HPV16感染状况进行比较分析, 结果见表3, 差异均无统计学意义(χ2 = 0.301, 0.149, 2.876, 0.105; 均P>0.05).

表3 HPV16在食管鳞癌中的感染状况 n(%).
nHPV+HPV-χ2值P值
年龄(岁)
<50197(36.8)12(63.2)0.3010.583
≥506319(30.2)44(69.8)
性别
男5617(30.4)39(69.6)0.1490.700
女269(34.6)17(65.4)
病理分化程度
高分化3010(33.3)20(66.7)0.0610.970
中分化4213(31.0)29(69.0)
低分化103(30.0)7(70.0)
临床分期(TNM)
T13010(33.3)20(66.7)0.1050.991
T2124(33.3)8(66.7)
T3309(30.0)21(70.0)
T4103(30.0)7(70.0)
2.3 HPV16 E6-PCR扩增产物抽样测序结果

与GenBank注册的标准序列(序列号: AF534061)比对, 同源率达98%(图3).

图3
图3 HPV16 E6-PCR扩增产物正反方向抽样测序结果. A: 正方向; B: 反方向.
3 讨论

食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一, 其发病率在世界范围内存在着明显的地域性差异和一定的民族差异[5-8], 体现出人群对疾病的遗传易感性, 提示人群的遗传背景与环境因素在食管癌的发生与发展过程中所起的独特作用. 早在1982年Syrjanen et al[9]通过组织学观察发现食管鳞癌有HPV感染以来, 有关HPV与食管鳞癌的报道颇多, 其感染率在不同的国家、不同的地区及同一地区差异极大, 检出率在0%-69%[5-8], 造成这些差异的原因可能与病例的来源、环境地理因素、遗传易感性和分析方法不同有关[10]. 近年有学者研究表明, HPV16、18也是食管癌的主要高危亚型[11-14], 在食管鳞癌中以HPV16型为主.

新疆是一个多民族居住区, 也是我国食管癌高发区之一, 其发病率以哈萨克族最高, 其次是维吾尔族和汉族, 塔吉克族最低[15]. 近年来, 本地区研究人员对新疆哈萨克族食管癌与HPV的关系进行了探讨, 陈玲 et al[16]运用半巢式PCR技术检测了150例哈萨克族食管癌, HPV16型检出率为38.7%. 郭伟鹏 et al[17]采用PCR技术扩增哈萨克族食管癌患者HPV16 E6基因, 阳性率为 44.4%, 并对其进行了克隆及全序列分析. 结果证实了HPV16感染与新疆哈萨克族食管癌的发生密切相关, 但作为发病率仅次于哈萨克族的维吾尔族食管癌与HPV的相关性研究未见明确的报道.

本研究通过PCR法揭示在新疆维吾尔族食管鳞癌病变组和癌旁正常食管黏膜组HPV16的感染率的分布, 分别为31.7%和12.5%, 食管鳞癌病变组明显高于癌旁正常食管黏膜组, 两者相比差异有统计学意义(P<0.05), 这提示HPV16的感染与食管鳞癌的发生有一定的关系. 我们的研究与本地区哈萨克族食管癌中的HPV感染的研究结果一致[18-19]. 同时, 按照病理资料分析, HPV16感染与食管鳞癌的发病年龄、性别、病理分化程度以及肿瘤的临床分期无明显的关联性, 其差异均无统计学意义(χ2分别为0.301, 0.149, 2.876, 0.105; 均P>0.05). 在宫颈癌的研究结果中[19-20]也发现HPV检出率与肿瘤临床病理指标(如肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期等)之间无显著的相关性.

总之, 从我们的研究中证实HPV16感染的确存在于新疆维吾尔族食管鳞癌中, HPV16感染与其存在一定的相关性. HPV16感染可能在食管癌的发生与发展中的发挥一定的作用, 我们认为, 尚需加大样本量和采取相应的分子生物学技术进一步研究. 我们的研究结果对干预治疗食管癌具有重要的意义.

评论
背景资料

最早在1982年由Syrijanen提出, 食管鳞癌有HPV感染. 20多年来, 有关HPV与食管鳞癌的报道颇多, 其感染率在不同的国家、地区及同一地区差异极大.

同行评议者

陈洪, 副教授, 东南大学附属中大医院消化科; 唐世刚, 教授, 大连大学附属中山医院消化内科

创新盘点

本研究采用敏感性较好的聚合酶链反应(PCR)技术首次对新疆维吾尔族食管鳞癌和癌旁正常食管黏膜标本中的HPV16型感染状况进行检测和分析, 初步探讨了HPV16感染与维吾尔族食管鳞癌发生的相关性.

应用要点

本研究首次为新疆地区维吾尔族食管癌积累流行病学资料及干预治疗提供生物学依据, 可能对本地区开展高危型HPV感染的预防及降低新疆地区维吾尔族食管癌发病率有重要的指导意义.

同行评价

本研究采用合理的方法对HPV16与新疆维吾尔族食管鳞癌的相关性进行分析, 对研究新疆地区食管癌的发病机制有一定的价值.

编辑: 李军亮 电编: 吴鹏朕

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